血管內(nèi)皮和平滑肌細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)構(gòu)建組織工程化血管的方法初探.pdf

1、目的：探索血管內(nèi)皮細(xì)胞(EC)和平滑肌細(xì)胞(SMC)聯(lián)合培養(yǎng)的方法，對(duì)其培養(yǎng)、擴(kuò)增條件加以摸索，為進(jìn)一步細(xì)胞植入PGA支架及血管的構(gòu)建提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 材料與方法：無(wú)菌條件下收集山西醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院婦產(chǎn)外科和山西省人民醫(yī)院婦產(chǎn)外科2007年5月到2008年2月的分娩新鮮臍帶手術(shù)標(biāo)本，仔細(xì)剝離臍帶動(dòng)靜脈，用胰酶消化法、膠原酶消化法、胰酶和膠原酶聯(lián)合消化法、ROSS法進(jìn)行內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞的聯(lián)合培養(yǎng)，用含20％胎牛血清的DME

2、M培養(yǎng)液培養(yǎng)、擴(kuò)增細(xì)胞。采用倒置相差顯微鏡、免疫熒光方法、免疫組織化學(xué)方法對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞進(jìn)行鑒定。對(duì)聯(lián)合培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行凍存和復(fù)蘇，為進(jìn)一步細(xì)胞植入PGA支架提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 結(jié)果：經(jīng)18次嘗試后，采用胰酶消化法，倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞貼壁很差，幾乎沒(méi)有細(xì)胞生長(zhǎng)；采用膠原酶消化法18次、胰酶和膠原酶聯(lián)合消化法11次后在倒置相差顯微鏡下亦發(fā)現(xiàn)細(xì)胞牛長(zhǎng)很稀少。采用ROSS法7次在倒置相差顯微鏡下5到7天觀察即可看到有細(xì)胞萌出，在

3、經(jīng)過(guò)換液傳代后可以培養(yǎng)得到血管內(nèi)皮和平滑肌細(xì)胞，在倒置顯微鏡顯示原代細(xì)胞及經(jīng)傳代培養(yǎng)后的細(xì)胞，呈現(xiàn)鋪路石內(nèi)皮樣細(xì)胞、梭型平滑肌樣混合生長(zhǎng)的特征。免疫熒光化學(xué)檢測(cè)和免疫組織化學(xué)示內(nèi)皮細(xì)胞Ⅷ因子、平滑肌細(xì)胞α-肌動(dòng)蛋白呈陽(yáng)性反應(yīng)。細(xì)胞經(jīng)3-5次傳代，細(xì)胞數(shù)量可增殖達(dá)到8×106～10×106。 結(jié)論：通過(guò)本次探索可以得到以下結(jié)論(1)臍帶血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)能夠成功。 (2)胰酶消化法、膠原酶消化法、胰酶和膠原酶