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文檔簡介
1、目的: 探索快速可靠檢測外科感染性疾病病原菌的新方法。 方法: 分析細(xì)菌16S rRNA基因序列,在高度保守區(qū)自行設(shè)計(jì)通用引物和探針,以及革蘭氏陽性和陰性分型探針,對12種標(biāo)準(zhǔn)菌株、23種臨床培養(yǎng)分離株、乙型肝炎病毒、新型隱球菌及白色念珠菌、人基因組DNA等進(jìn)行了熒光定量檢測,分析三種探針檢測結(jié)果的相關(guān)性。并用革蘭氏陽性和陰性分型探針對外科急性闌尾炎、急性腹膜炎、急性腸套疊、腸梗阻以及皮膚軟組織膿腫等疾病手術(shù)中所
2、得的腹水或者膿液標(biāo)本共102例行實(shí)時熒光定量PCR檢測,結(jié)果與細(xì)菌培養(yǎng)做比較。 結(jié)果: 所有標(biāo)本檢測均在3小時以內(nèi)完成;12種標(biāo)準(zhǔn)菌株、23種臨床培養(yǎng)分離株均進(jìn)行三種探針的熒光定量檢測:通用探針均為陽性,18株革蘭氏陽性菌株通過革蘭氏陽性探針(G+Probe探針)檢測為陽性,17株革蘭氏陰性菌株通過革蘭氏陰性探針(G-Probe探針)檢測為陽性,反之均為陰性,吻合率100%;最低能檢測到10個拷貝的16S rRNA基因,
3、即相當(dāng)于2個細(xì)菌,與病毒、真菌及人基因組DNA等無交叉陽性反應(yīng);感染性疾病腹水標(biāo)本(包括急性闌尾炎和急性腹膜炎組病例標(biāo)本)細(xì)菌16S rRNA基因?qū)崟r熒光定量PCR檢測陽性率為82.5%(66/80),細(xì)菌培養(yǎng)陽性率為32.5%(26/80),前者明顯高于后者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),且所有細(xì)菌培養(yǎng)G-陽性標(biāo)本G-Probe探針檢測結(jié)果均為陽性,所有細(xì)菌培養(yǎng) G+陽性標(biāo)本G+Probe探針檢測結(jié)果均為陽性。36例G+Probe
4、以及G-Probe探針檢測結(jié)果均為陽性腹水標(biāo)本中有22例標(biāo)本細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果為G+或者G-單一細(xì)菌陽性。非感染性疾病組病例細(xì)菌16S rRNA基因?qū)崟r熒光定量檢測陽性率為6.25%(1/16),細(xì)菌培養(yǎng)無陽性標(biāo)本;膿液標(biāo)本檢測,細(xì)菌16S rRNA基因熒光定量PCR陽性率100%,高于細(xì)菌培養(yǎng)的50%。 結(jié)論: 細(xì)菌16S rRNA基因雙探針實(shí)時熒光定量PCR法具備敏感性高、特異性好和方便快速等特點(diǎn),可以在外科感染性疾病中給
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