細(xì)菌16S rRNA基因?qū)崟r(shí)熒光定量PCR分型在外科感染性疾病中的應(yīng)用.pdf

1、目的： 探索快速可靠檢測(cè)外科感染性疾病病原菌的新方法。 方法： 分析細(xì)菌16S rRNA基因序列，在高度保守區(qū)自行設(shè)計(jì)通用引物和探針，以及革蘭氏陽(yáng)性和陰性分型探針，對(duì)12種標(biāo)準(zhǔn)菌株、23種臨床培養(yǎng)分離株、乙型肝炎病毒、新型隱球菌及白色念珠菌、人基因組DNA等進(jìn)行了熒光定量檢測(cè)，分析三種探針檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)性。并用革蘭氏陽(yáng)性和陰性分型探針對(duì)外科急性闌尾炎、急性腹膜炎、急性腸套疊、腸梗阻以及皮膚軟組織膿腫等疾病手術(shù)中所

2、得的腹水或者膿液標(biāo)本共102例行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)，結(jié)果與細(xì)菌培養(yǎng)做比較。 結(jié)果： 所有標(biāo)本檢測(cè)均在3小時(shí)以內(nèi)完成；12種標(biāo)準(zhǔn)菌株、23種臨床培養(yǎng)分離株均進(jìn)行三種探針的熒光定量檢測(cè)：通用探針均為陽(yáng)性，18株革蘭氏陽(yáng)性菌株通過革蘭氏陽(yáng)性探針(G+Probe探針)檢測(cè)為陽(yáng)性，17株革蘭氏陰性菌株通過革蘭氏陰性探針(G-Probe探針)檢測(cè)為陽(yáng)性，反之均為陰性，吻合率100％；最低能檢測(cè)到10個(gè)拷貝的16S rRNA基因，

3、即相當(dāng)于2個(gè)細(xì)菌，與病毒、真菌及人基因組DNA等無(wú)交叉陽(yáng)性反應(yīng)；感染性疾病腹水標(biāo)本(包括急性闌尾炎和急性腹膜炎組病例標(biāo)本)細(xì)菌16S rRNA基因?qū)崟r(shí)熒光定量PCR檢測(cè)陽(yáng)性率為82.5％(66／80)，細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性率為32.5％(26／80)，前者明顯高于后者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，且所有細(xì)菌培養(yǎng)G-陽(yáng)性標(biāo)本G-Probe探針檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性，所有細(xì)菌培養(yǎng) G+陽(yáng)性標(biāo)本G+Probe探針檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性。36例G+Probe

4、以及G-Probe探針檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性腹水標(biāo)本中有22例標(biāo)本細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果為G+或者G-單一細(xì)菌陽(yáng)性。非感染性疾病組病例細(xì)菌16S rRNA基因?qū)崟r(shí)熒光定量檢測(cè)陽(yáng)性率為6.25％(1／16)，細(xì)菌培養(yǎng)無(wú)陽(yáng)性標(biāo)本；膿液標(biāo)本檢測(cè)，細(xì)菌16S rRNA基因熒光定量PCR陽(yáng)性率100％，高于細(xì)菌培養(yǎng)的50％。 結(jié)論： 細(xì)菌16S rRNA基因雙探針實(shí)時(shí)熒光定量PCR法具備敏感性高、特異性好和方便快速等特點(diǎn)，可以在外科感染性疾病中給