雙歧桿菌DNA上調(diào)臍帶血單個(gè)核細(xì)胞T-,H-1應(yīng)答.pdf

1、該實(shí)驗(yàn)采用益生菌中常見的雙歧桿菌作為研究對(duì)象,觀察其基因組DNA對(duì)臍帶血單個(gè)核細(xì)胞(CBMC)的影響,以了解雙歧桿菌DNA的免疫調(diào)節(jié)作用,探討雙歧桿菌抗過敏反應(yīng)可能的機(jī)制.研究方法厭氧培養(yǎng)雙歧桿菌,提取純化雙歧桿菌基因組DNA(Bifidobacterium DNA,bDNA)體外刺激臍帶血單個(gè)核細(xì)胞(CBMC),以空白、DNase Ⅰ完全酶解的bDNA和人DNA作為對(duì)照.實(shí)驗(yàn)分組:①空白對(duì)照組:無任何刺激物;②雙歧桿菌基因組DNA(b

2、DNA)(加入bDNA 25μg/ml)組;③完全酶解雙歧桿菌基因組DNA(d-bDNA)(加入d-bDNA 25μg/ml)組;④人類DNA(hDNA)(加入hDNA 25μg/ml)組.在刺激后4個(gè)時(shí)間點(diǎn)(6h、1 2h、24h、48h)終止培養(yǎng),收集細(xì)胞并保存培養(yǎng)上清,用于檢測(cè)以下指標(biāo):1 ELISA(Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay)測(cè)定培養(yǎng)上清中單核-巨噬細(xì)胞源細(xì)胞因子IL-12、IL-10

3、的水平;2觀察bDNA對(duì)T細(xì)胞源細(xì)胞因子IFN-γ和IL-4分泌的影響:采用ELISPOT(Enzyme Linked Immuno Spot)法計(jì)數(shù)分泌IFN-γ和IL-4的陽性細(xì)胞數(shù)量;3抽提細(xì)胞總RNA,逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA,然后PCR(PolymeraseChain Reaction)法擴(kuò)增目的cDNA,以檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)蛋白T-bet(T-box expressed in T cells)、GATA3 mRNA表達(dá)強(qiáng)度的變化.結(jié)論

4、:bDNA能夠促使CBMC分泌Th1型細(xì)胞因子IL-12增加,而Th2型細(xì)胞因子IL-10的水平有下降的趨勢(shì);bDNA的刺激可導(dǎo)致分泌IFN-γ的陽性細(xì)胞數(shù)量增多,而分泌IL-4的陽性細(xì)胞數(shù)量減少;bDNA可促使T細(xì)胞中T-bet mRNA表達(dá)增高,但對(duì)GATA3 mRNA表達(dá)影響不明顯.以上結(jié)果提示雙歧桿菌基因組DNA可上調(diào)CBMC IL-12、IFN-γ分泌及T-bet表達(dá),下調(diào)IL-4分泌,從而促進(jìn)CBMC T<,H>1應(yīng)答.這可