體內(nèi)Period2基因調(diào)控X線照射后人膠質(zhì)瘤細(xì)胞MDM2基因致凋亡的分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：體內(nèi)探究生物鐘基因Period2的低表達(dá)在X線照射引起的膠質(zhì)瘤凋亡過程中起到的作用及其分子調(diào)控機(jī)制。
　　方法： Period2-shRNA慢病毒、Control-shRNA非特異性干擾慢病毒各自感染人p53野生型人膠質(zhì)瘤U343細(xì)胞后，shRNA-Period2細(xì)胞組（Period2低表達(dá)）及對(duì)照病毒細(xì)胞組由puromycin篩選出；shRNA-Period2細(xì)胞組、Control對(duì)照病毒細(xì)胞組及 Control空白處理細(xì)

2、胞組分別注射裸鼠頸后皮下，等到各組裸鼠成瘤的瘤塊體積達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)（1000mm3），給予10Gy X線照射3組膠質(zhì)瘤并以此時(shí)為0時(shí)，分別于24h、48h、72h后，處死裸鼠并收集瘤體組織。TUNEL技術(shù)檢測實(shí)驗(yàn)組凋亡情況、磷酸化H2AX含量檢測實(shí)驗(yàn)組的DNA的損傷情況，使用qRT-PCR及Western Blot檢測，X線照射后，實(shí)驗(yàn)各組中與DNA損傷-修復(fù)重要因子ATM、凋亡相關(guān)的p53、MDM2以及c-myc等的含量。
　　結(jié)果：

3、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)可見Period2-shRNA慢病毒有效降低在人膠質(zhì)瘤U343細(xì)胞中生物鐘基因Period2的表達(dá)含量；X線處理后，在X線處理后的24h、48h、72h各個(gè)時(shí)間點(diǎn)，跟Control實(shí)驗(yàn)組比較，Period2低表達(dá)的實(shí)驗(yàn)組DNA損傷更輕，凋亡率更低，且隨著時(shí)間的增加，Period2低表達(dá)組的DNA損傷和細(xì)胞凋亡都開始遞增；隨Period2表達(dá)量的下調(diào)，ATM表達(dá)水平減少，p53表達(dá)水平減少，而 c-myc的表達(dá)水平增加，MDM2的