激光微孔豬脫細胞真皮基質(zhì)的生物相容性檢測及其移植實驗.pdf

1、背景：由于同種異體皮來源有限，國內(nèi)外學者一直尋求用異種來源的脫細胞真皮基質(zhì)(acellular dermal matrix，ADM)作為真皮支架來治療深度皮膚損傷。豬來源的ADM由于來源廣、價格相對較低[1]、且在制備成ADM后能夠保持完整的三維立體結(jié)構(gòu)而成為當前研究的熱點[2]，但其血管化速度慢，限制了其在臨床上的廣泛推廣[3]。
　　 目的：檢測激光微孔豬脫細胞真皮基質(zhì)(Laser micropore porcine ace

2、llulardermal matrix，LPADM)的生物相容性及其移植后的血管化速度，探討LPADM在臨床上廣泛應(yīng)用的可能。
　　 方法：(1)切取成年雄性SD大鼠的背部全層皮膚，酶消化法分離出其中的成纖維細胞并培養(yǎng)至第三代，將其得到的成纖維細胞隨機分為A、B、C三組，其中A組為與LPADM共培養(yǎng)組；B組為與無孔ADM共培養(yǎng)組；C組為單純培養(yǎng)組，觀察各組成纖維細胞生長、增殖的情況，并利用雙夾心抗體ELISA法檢測接種后第1、3

3、、5天各組成纖維細胞活性細胞因子IL-6、IL-10、TGF-β1、VEGF、LN的分泌。(2)取成年健康雄性SD大鼠18只，在其背部正中脊柱二側(cè)相對位置各做一2cm×2cm的“U”形皮瓣，并將皮瓣掀起，分別移植包埋LPADM及無孔ADM，于術(shù)后1、3、10天切取標本行組織學及電鏡檢查。(3)健康無皮膚疾病雄性裸鼠36只，隨機分為實驗組和對照組，“二步法”完成手術(shù)過程，其中實驗組移植LPADM和自體薄皮，對照組移植無孔ADM和自體薄皮，

4、于術(shù)后1、3、14天各組分別取6只裸鼠處死，切取標本行HE組織學檢查及電鏡檢查。
　　 結(jié)果：(1)共培養(yǎng)條件下，LPADM和無孔ADM均不會產(chǎn)生細胞毒性物質(zhì)影響成纖維細胞的生長、增殖及活性細胞因子的分泌，實驗檢測到A、B、C三組的成纖維細胞均能夠在15min內(nèi)快速貼壁，接種后各組成纖維細胞的細胞活性因子IL-6、IL-10、TGF-β1、VEGF、LN無明顯差別，差異無顯著性(P>0.05)。(2)皮下包埋術(shù)后1天，LPADM

5、的膠原中即可見類血管內(nèi)皮細胞，術(shù)后3天，微孔結(jié)構(gòu)中即可見新生組織長入，移植物能夠與周圍自體組織緊密結(jié)合，術(shù)后第10天，LPADM可見明顯的血管化。而移植的無孔ADM在整個實驗觀察中未見新生血管形成，且炎癥反應(yīng)較重。(3)實驗組術(shù)后1、3天的組織學切片：及掃描電鏡顯示，含豐富血管的基底新生組織可以通過微孔結(jié)構(gòu)長入LPADM的內(nèi)部，從而完成LPADM的快速血管化。實驗組術(shù)后3、14天組織學切邊顯示：微孔結(jié)構(gòu)的存在還可以為成纖維細胞向LPAD

6、M中的遷移提供一條快速通道，為LPADM膠原網(wǎng)架功能的重建提供基礎(chǔ)。實驗組術(shù)后14天掃描電鏡顯示：LPADM中遷入的成纖維細胞細胞質(zhì)中粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)較多，膠原分泌旺盛，正積極參與真皮的修復(fù)。對照組的ADM中未見明顯的成纖維細胞遷入，且炎癥反應(yīng)較重，無法與機體快速緊密的結(jié)合在一起。
　　 結(jié)論：設(shè)計的這種LPADM生物相容性高；不會產(chǎn)生對細胞有毒性的物質(zhì)，移植后免疫源性低。且微孔結(jié)構(gòu)能夠為LPADM的血管化提供通道，大大加快LPADM