生殖器皰疹病毒體外對(duì)阿昔洛韋、伐昔洛韋的藥敏測(cè)定以及空斑法提取阿昔洛韋耐藥株.pdf

1、HSV是引起單純皰疹和生殖器皰疹的主要病原體。近年來(lái)，許多國(guó)家流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，生殖器皰疹的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。而且由于性行為方式的改變，由HSV-1引起的生殖器皰疹的比率也逐年增加。隨著核苷類(lèi)抗病毒藥的廣泛使用和器官移植技術(shù)的成熟，以及HIV發(fā)病率的增加，國(guó)外關(guān)于HSV對(duì)抗皰疹病毒藥的敏感性降低甚至出現(xiàn)耐藥株的報(bào)道逐漸增多。HSV耐藥株首先從免疫功能減弱的感染者分離到。核苷類(lèi)抗皰疹病毒藥是應(yīng)用最廣泛的一類(lèi)，阿昔洛韋[9-(2-羥

2、乙氧甲基)鳥(niǎo)嘌呤]是其代表藥物。目前關(guān)于HSV耐藥株存在兩種分歧，部分學(xué)者認(rèn)為長(zhǎng)期使用抗皰疹病毒藥物會(huì)導(dǎo)致病毒生存壓力而引起耐藥，而另一部分學(xué)者則持相反意見(jiàn)，認(rèn)為在抗皰疹病毒使用二十多年后的大規(guī)模調(diào)查中，并未發(fā)現(xiàn)病毒的藥物敏感性有明顯上升趨勢(shì)。關(guān)于HSV的藥物敏感性研究國(guó)內(nèi)相對(duì)較少。因此，我們對(duì)目前南京地區(qū)部分HSV臨床株進(jìn)行了阿昔洛韋和鹽酸伐昔洛韋的藥物敏感性測(cè)定，并進(jìn)一步在體外用藥物誘導(dǎo)及空斑純化的方法提取藥物不敏感株，以初步了解該

3、地區(qū)流行株的藥敏程度并建立體外藥物誘導(dǎo)，空斑純化篩選HSV耐藥株的方法。 一、對(duì)2005年5月至2005年11月在我所性病門(mén)診就診的50例生殖器皰疹患者標(biāo)本用細(xì)胞培養(yǎng)的方法分離HSV臨床毒株，并進(jìn)行熒光單克隆抗體分型。總共收集病例50例，男40例，女10例。細(xì)胞培養(yǎng)陽(yáng)性27例，分離率54％，直接免疫熒光分型全部為HSV-2型感染。本次發(fā)病用過(guò)核苷類(lèi)抗病毒藥15例，細(xì)胞培養(yǎng)陽(yáng)性10例(66.67％)，未用過(guò)核苷類(lèi)抗病毒藥35例，培

4、養(yǎng)陽(yáng)性17例(48.57％)，x2檢驗(yàn)P＞0.05，用藥組與未用藥組培養(yǎng)陽(yáng)性率無(wú)顯著性差異。對(duì)21株病毒毒力測(cè)定結(jié)果顯示：水皰、膿皰期病毒毒力高于潰瘍、糜爛、結(jié)痂期。 二、用MTT法測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)株及15株Ⅱ型HSV對(duì)阿昔洛韋(ACV)，伐昔洛韋(VCV)的半數(shù)病毒抑制濃度(IC50)，并分析其中初發(fā)組與復(fù)發(fā)組，用藥組與未用藥組在藥物敏感性上有無(wú)差異。15株臨床毒株對(duì)ACV、VCV均高度敏感。ACV的IC50在0.0215～0.279

5、9μg/ml之間(平均0.0766μg/ml)，VCV的IC50在0.0549～0.4575μg/ml之間(平均0.1605μg/ml)。擴(kuò)增出的15例HSV-2型病毒中，初發(fā)8例，平均年齡35.8歲，其中男性6例，女性2例；復(fù)發(fā)7例，平均年齡36歲，全部為男性。用過(guò)核苷類(lèi)抗病毒藥6例，均為復(fù)發(fā)，最后一次服藥距來(lái)診間隔1天～3月。未用藥9例，其中1例為第二次發(fā)病，因前次自愈未用藥。初發(fā)組ACV和VCV的IC50分別為0.258～0.95

6、0μg/ml(平均0.0489μg/ml)，0.0701～0.1866μg/ml(平均0.1191μg/ml)；復(fù)發(fā)組ACV和VCV的IC50分別為0.0215～0.2799μg/ml(平均0.0954μg/ml)，0.0549～0.4575μg/ml(平均0.1940μg/ml)；用藥組ACV和VCV的IC50分別為0.0215～0.2799μg/ml(平均0.0954μg/ml)，0.0549～0.4575μg/ml(平均0.163

7、9μg/ml)；未用藥組ACV和VCV的IC50分別為0.258～0.960μg/ml(平均0.0541μg/ml)，0.0701～0.3750μg/ml(平均0.1476μg/ml)。數(shù)據(jù)采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，P值均＞0.05，初發(fā)與復(fù)發(fā)組，用藥與未用藥組對(duì)ACV，VCV的敏感性均無(wú)顯著差異。 三、臨床株及實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)株用MTT法進(jìn)行ACV敏測(cè)定。將HSV實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)株與臨床株依次置于含2μg/ml、5μg/mlACV的半

8、固體培養(yǎng)液中培養(yǎng)，提取空斑，擴(kuò)增后MTT法測(cè)定其對(duì)ACV的藥物敏感性。HSV-1Sam標(biāo)準(zhǔn)株ACV的IC50為0.0336μg/ml;HSV-2333株ACV的IC50為0.0616μg/ml。從HSV-1Sam標(biāo)準(zhǔn)株中提取到1個(gè)耐藥空斑；從HSV-2333標(biāo)準(zhǔn)株中提取到11個(gè)耐藥空斑，擴(kuò)增出9株；從15株臨床株中未提取到耐藥空斑。從HSV-1Sam株提取的空斑對(duì)ACV的IC50為13.359μg/ml;從HSV-2333株提取擴(kuò)增出的