小鼠原位肝癌移植模型中髓系來源抑制性細胞的表達和功能檢測.pdf

1、背景：目的：肝細胞肝癌(Hepatocellularcarcinoma，HCC)是臨床上常見的惡性腫瘤，尤其是在我國發(fā)病率與死亡率均比較高。近年來腫瘤免疫治療逐漸受到重視，免疫治療的目的就是打破機體或腫瘤局部的免疫耐受或免疫抑制，提高機體自身的免疫活性，抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展，這使得HCC的免疫防治研究日趨重要。研究發(fā)現(xiàn)在荷瘤小鼠的血液、脾臟和腫瘤組織，以及腫瘤患者的外周血和腫瘤組織中存在大量的髓系來源抑制性細胞(myeloid-derive

2、dsuppressorcells，MDSCs)，通過抑制機體免疫功能促進腫瘤發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移。本實驗旨在研究MDSCs在小鼠肝癌原位移植模型中的表達分布及其生物學功能，為后續(xù)開展MDSCs生物學、免疫學相關研究以及以MDSCs為靶標的肝癌免疫療法提供實驗及理論基礎。
　　 實驗方法：將H22小鼠肝癌細胞注射到BALB/c雄性小鼠肝臟包膜下，構(gòu)建小鼠原位肝癌移植模型，10天后處死荷瘤小鼠，收集正常小鼠和荷瘤小鼠的外周血、骨髓、脾臟以及

3、肝臟。通過流式細胞技術檢測兩組小鼠各個器官組織中MDSCs及其亞型聚集分布情況。進一步我們通過流式分選技術分選荷瘤小鼠骨髓中MDSCs并流式檢測分選得到的MDSCs精氨酸代謝酶1、誘導型一氧化氮合酶及活性氧的表達，通過混合淋巴細胞反應檢測MDSCs對T細胞增殖的影響。
　　 結(jié)果：本實驗成功構(gòu)建小鼠原位移植肝癌模型;不論是在外周血、骨髓還是脾臟中，荷瘤小鼠中MDSCs及其亞型的表達均明顯上調(diào)，差異具有統(tǒng)計學意義;荷瘤小鼠肝臟中M

4、DSCs及其兩個亞型的表達較正常小鼠肝臟也有明顯增高，在肝癌組織中MDSCs的表達較正常小鼠肝臟上調(diào)6.7倍，MDSCs兩個亞型表達分別上調(diào)7.2倍和3.3倍;通過流式雙色標記分選得到的MDSCs細胞不僅純度高而且活力好，并且高表達Arg-1、iNOS和ROS，還能明顯抑制T細胞增殖。
　　 結(jié)論：在小鼠原位肝癌移植模型中，MDSCs表達明顯上調(diào)，與臨床肝癌患者表現(xiàn)一致;通過流式分選方法獲得純度高活力佳的骨髓系MDSCs細胞，這