一種半乳糖酯修飾的齊多夫定硬酯酸酯脂質(zhì)體的研究.pdf

1、艾滋病(AIDS)是由人類免疫缺陷病毒(HIV)感染導(dǎo)致人體免疫機(jī)能缺陷而易于發(fā)生機(jī)會(huì)性感染和腫瘤的臨床綜合征。高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法(HAART)能抑制HIV復(fù)制,降低AIDS的發(fā)病率和死亡率,但仍存在藥物無法徹底清除HIV、難以在HIV病毒貯庫中達(dá)到有效濃度、長期用藥易產(chǎn)生多藥耐藥等問題。因此,針對(duì)HIV貯庫開發(fā)新的給藥系統(tǒng)是當(dāng)前國際上抗AIDS研究中的一個(gè)熱點(diǎn)和難點(diǎn)。由于巨噬細(xì)胞是HIV病毒貯庫中至關(guān)重要的一個(gè)細(xì)胞群,近年來主動(dòng)靶向

2、巨噬細(xì)胞的給藥系統(tǒng)研究成為一個(gè)新的熱點(diǎn)。
　　 在抗HIV藥物靶向載體中,脂質(zhì)體是研究最多、最有臨床應(yīng)用前景的一類載體。脂質(zhì)體能促進(jìn)某些抗HIV藥物的細(xì)胞內(nèi)傳遞,增強(qiáng)藥物的治療效果。但未經(jīng)修飾的脂質(zhì)體只具有被動(dòng)靶向性,為了更特異性地靶向HIV感染細(xì)胞,本文設(shè)計(jì)了一種能夠與巨噬細(xì)胞膜上的半乳糖顆粒受體特異性結(jié)合,主動(dòng)靶向巨噬細(xì)胞的新型脂質(zhì)體:半乳糖酯修飾的齊多夫定硬脂酸酯脂質(zhì)體,并進(jìn)行體外主動(dòng)靶向性的評(píng)價(jià)研究。預(yù)期這種新型脂質(zhì)體對(duì)

3、HIV病毒貯庫(巨噬細(xì)胞)具有高度選擇性,能減少AIDS治療過程中耐藥株出現(xiàn)的機(jī)率。其可以作為抗艾滋病藥物的理想劑型,也可以作為其他抗病毒藥物的靶向給藥劑型,具有良好的應(yīng)用前景。
　　 本文的研究內(nèi)容主要包括以下方面:
　　 1.自主合成了齊多夫定(AZT)的脂溶性前藥齊多夫定硬脂酸酯(AZTS)和具有主動(dòng)靶向巨噬細(xì)胞膜上半乳糖顆粒受體功能的半乳糖酯,即D-半乳糖基-4[(4-{[(膽甾烷-3-氧基)羰基]氨基}丁基)氨

4、基]-4-羰基丁酯(D-galactosyl-4-[(4-{[(cholestan-3-yloxy)carbonyl]amino}butyl)amino]-4-oxobutanoate,縮寫為GCOE)。與AZT相比,AZTS的脂溶性明顯提高(logPoct=5.22),更適宜脂質(zhì)體制劑的制備;AZTS脂質(zhì)體包封率高,且不易泄露。本文中合成GCOE的反應(yīng)條件溫和,用正相硅膠柱即能有效分離純化,操作簡(jiǎn)單。
　　 2.建立了AZTS

5、的體外HPLC分析方法和AZTS脂質(zhì)體包封率的測(cè)定方法(微孔濾膜過濾分離-HPLC檢測(cè)藥物含量),采用薄膜分散法或乙醇注入法結(jié)合擠出儀整粒技術(shù)制備AZTS脂質(zhì)體。最優(yōu)處方為磷脂含量為5％(W/V),藥脂比為1:20(W/W),總膽固醇與磷脂的質(zhì)量比為1:4,GCOE與膽固醇的質(zhì)量比為2:1。制備的脂質(zhì)體包封率高(85％以上),粒徑較小且均一(平均粒徑180nm,多分散指數(shù)0.371)。
　　 3.對(duì)GCOE修飾的脂質(zhì)體進(jìn)行了初步

6、的體外靶向性評(píng)價(jià)。GCOE對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7沒有毒性,生物相容性良好。通過與蓖麻凝集素的特異性凝集反應(yīng)證實(shí)了GCOE的親脂性膽甾烷基插入脂質(zhì)體的磷脂雙分子層,親水性的半乳糖基暴露于脂質(zhì)體外面,能與蓖麻凝集素特異性結(jié)合。由于AZTS本身不能激發(fā)熒光,本實(shí)驗(yàn)選擇了具有大共軛系統(tǒng),激發(fā)的熒光性質(zhì)較穩(wěn)定的阿霉素(DOX)作為熒光探針制備熒光脂質(zhì)體,對(duì)GCOE修飾的熒光脂質(zhì)體與巨噬細(xì)胞的體外親和力作了定性評(píng)價(jià);同時(shí),用MTT法對(duì)GCO