天祝白牦牛、岷縣黑裘皮羊成纖維細(xì)胞庫(kù)的構(gòu)建.pdf

1、本文選取天祝白牦牛、岷縣黑裘皮羊這兩種國(guó)家級(jí)畜禽遺傳資源保護(hù)品種作為研究對(duì)象，采用胰蛋白酶熱消化法，分別構(gòu)建這兩種動(dòng)物的多種組織的成纖維細(xì)胞庫(kù)，并對(duì)其生長(zhǎng)曲線、倍增時(shí)間、染色體核型、同工酶、微生物污染以及轉(zhuǎn)化表達(dá)外源基因等特性進(jìn)行研究，旨在成功地建立其成纖維細(xì)胞庫(kù)，從細(xì)胞水平上對(duì)優(yōu)良地方保護(hù)品種的遺傳資源進(jìn)行有效保存和利用，并為其它動(dòng)物遺傳資源保存提供可行的方法借鑒，同時(shí)所建的細(xì)胞庫(kù)還可為胚胎干細(xì)胞研究、轉(zhuǎn)基因工程、克隆等細(xì)胞分子生物學(xué)

2、研究提供寶貴材料。 天祝白牦牛保存樣本28個(gè)，凍存細(xì)胞472支；岷縣黑裘皮羊保存樣本23個(gè)，凍存細(xì)胞290支，試驗(yàn)結(jié)果如下： 1、培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)均為典型的成纖維型細(xì)胞，絕大部分呈梭形或不規(guī)則三角形，細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)呈放射狀、火焰狀或旋渦狀走勢(shì)，細(xì)胞增殖快，生長(zhǎng)旺盛。 2、繪制的細(xì)胞生長(zhǎng)曲線顯示，復(fù)蘇細(xì)胞生長(zhǎng)狀況很好，生長(zhǎng)曲線均呈“S”型，細(xì)胞每代生長(zhǎng)均經(jīng)歷了潛伏期、指數(shù)生長(zhǎng)期和停滯期，符合體外細(xì)胞生長(zhǎng)規(guī)律。 3

3、、復(fù)蘇后細(xì)胞活率均保持在90％以上，傳代后生長(zhǎng)狀況與凍存前基本一致，細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)速度沒(méi)有明顯變化，凍存細(xì)胞生物學(xué)特征穩(wěn)定。 4、微生物污染檢測(cè)呈陰性，表明細(xì)胞未受到細(xì)菌、真菌、病毒及支原體污染。 5、核型分析：天祝白牦牛體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞正常染色體數(shù)為2n=60，包括29對(duì)常染色體和1對(duì)性染色體，常染色體29對(duì)為端著絲點(diǎn)染色體，性染色體X和Y染色體為近中著絲粒染色體，計(jì)數(shù)50個(gè)細(xì)胞染色體數(shù)目時(shí)，并對(duì)2n=60的進(jìn)行統(tǒng)

4、計(jì)，為74％，染色體中二倍體占主體；岷縣黑裘皮羊體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞正常染色體數(shù)為2n=54，包括26對(duì)常染色體和1對(duì)性染色體，常染色體有3對(duì)為中著絲點(diǎn)染色體，23對(duì)為端著絲點(diǎn)染色體，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)50個(gè)細(xì)胞染色體，2n=54占84％，表明所建細(xì)胞庫(kù)的細(xì)胞穩(wěn)定的二倍體細(xì)胞占主體，遺傳性基本穩(wěn)定。 6、乳酸脫氫酶(LDH)同工酶是遺傳成因性的同工酶，天祝白牦牛各種細(xì)胞的乳酸脫氫酶同工酶都顯現(xiàn)五條區(qū)帶，從“陽(yáng)極”到“陰極”分別為L(zhǎng)DH<,

5、1>，LDH<,2>，LDH<,3> LDH<,4>，LDH<,5>，岷縣黑裘皮羊跟中細(xì)胞都顯現(xiàn)三條區(qū)帶，從“陽(yáng)極”到“陰極”分別為L(zhǎng)DH<,1>，LDH<,2>，LDH<,3>，通過(guò)LDH同工酶的區(qū)帶分布和相對(duì)百分含量的比較表明不同品種的LDH同工酶含量不同，說(shuō)明LDH同工酶具有明顯的品種特異性；各品種細(xì)胞LDH同工酶酶譜表明，細(xì)胞遺傳性能穩(wěn)定。 7、紅色熒光質(zhì)粒在成纖維細(xì)胞中的轉(zhuǎn)化表達(dá)，試驗(yàn)表明成纖維細(xì)胞未發(fā)生與其它物種細(xì)胞