CSFV、HP-PRRSV、PEDV和ASFV等病原GeXP多重檢測(cè)方法的建立和試劑盒的初步組裝.pdf

1、J[1llllJl[1lllllllJll[rlHP[rrllllllllJII’鋤1一I叫Y3293249舒婁號(hào)S豎j絲t力，I裝掌天訾學(xué)號(hào)S2Q14蛩墨專_qk碩士學(xué)位論文CSFV、HPPRRSV、PEDV和ASFV等病原GeXP多重檢測(cè)方法的建立和試劑盒的初步組裝指導(dǎo)教師校外導(dǎo)師羅忠永王印教授岳建國(guó)高級(jí)獸醫(yī)師(成都市動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心j學(xué)位類別獸醫(yī)碩士領(lǐng)域名稱病原分子生物學(xué)研究方向動(dòng)物檢疫2017年05月中文摘要研究目的：建立豬

2、瘟病毒、高致病性豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒、豬流行性腹瀉病毒和非洲豬瘟病毒等病原GeXP多重檢測(cè)方法，組裝GeXP多重檢測(cè)試劑盒并通過(guò)與單病原檢疫標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)比初步探究該試劑盒的應(yīng)用價(jià)值；綜合本研究成果及本實(shí)驗(yàn)室其他類似課題研究成果，最終建立基于GeXP技術(shù)的豬體重要疫病的高通量診斷技術(shù)。研究方法：1、選定核酸作為病原診斷的指示物，參考病原全基因組序列比對(duì)分析研究成果，遵循特異保守的原則，選定CSFV5UTR序列、HP—PRRSVNSP2

3、基因、ASFVB646L基因、PEDVM基因作為核酸檢測(cè)區(qū)段；從NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)下載各病原相應(yīng)核酸序列，使用生物學(xué)軟件比對(duì)分析根據(jù)毒株間保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物；特別地，設(shè)計(jì)的HP—PRRSV診斷引物要能區(qū)分PRRSV毒株和HPPRRSV毒株。2、根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的引物建立單病原PCR診斷方法，通過(guò)疫苗參考毒株及實(shí)驗(yàn)室分離鑒定毒株分析單病原單重PCR的特異性；利用體外轉(zhuǎn)錄合成的CSFV、HPPRRSV、PEDVRNA標(biāo)準(zhǔn)品和構(gòu)建的ASFV質(zhì)粒分析單病

4、原單重PCR的靈敏度；根據(jù)特異性和靈敏度實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析引物設(shè)計(jì)是否符合設(shè)計(jì)預(yù)期。3、以鑒定符合設(shè)計(jì)預(yù)期的引物，參考GeXP實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)建立本研究的4種病原GeXP多重檢測(cè)方法，通過(guò)疫苗參考毒株及實(shí)驗(yàn)室分離鑒定毒株分析4種病原GeXP多重檢測(cè)方法的特異性；通過(guò)RNA標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)粒分析4種病原GeXP多重檢測(cè)方法的單病原和多病原靈敏度；根據(jù)特異性和靈敏度實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析本實(shí)驗(yàn)建立的4種病原GeXP多重檢測(cè)方法的可行性。4、根據(jù)實(shí)驗(yàn)成果組裝GeXP多重檢