CSFV、HP-PRRSV、PEDV和ASFV等病原GeXP多重檢測方法的建立和試劑盒的初步組裝.pdf

1、J[1llllJl[1lllllllJll[rlHP[rrllllllllJII’鋤1一I叫Y3293249舒婁號S豎j絲t力，I裝掌天訾學號S2Q14蛩墨專_qk碩士學位論文CSFV、HPPRRSV、PEDV和ASFV等病原GeXP多重檢測方法的建立和試劑盒的初步組裝指導教師校外導師羅忠永王印教授岳建國高級獸醫(yī)師(成都市動物疾病預防控制中心j學位類別獸醫(yī)碩士領域名稱病原分子生物學研究方向動物檢疫2017年05月中文摘要研究目的：建立豬

2、瘟病毒、高致病性豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒、豬流行性腹瀉病毒和非洲豬瘟病毒等病原GeXP多重檢測方法，組裝GeXP多重檢測試劑盒并通過與單病原檢疫標準方法對比初步探究該試劑盒的應用價值；綜合本研究成果及本實驗室其他類似課題研究成果，最終建立基于GeXP技術的豬體重要疫病的高通量診斷技術。研究方法：1、選定核酸作為病原診斷的指示物，參考病原全基因組序列比對分析研究成果，遵循特異保守的原則，選定CSFV5UTR序列、HP—PRRSVNSP2

3、基因、ASFVB646L基因、PEDVM基因作為核酸檢測區(qū)段；從NCBI數(shù)據(jù)庫下載各病原相應核酸序列，使用生物學軟件比對分析根據(jù)毒株間保守區(qū)域設計引物；特別地，設計的HP—PRRSV診斷引物要能區(qū)分PRRSV毒株和HPPRRSV毒株。2、根據(jù)實驗設計的引物建立單病原PCR診斷方法，通過疫苗參考毒株及實驗室分離鑒定毒株分析單病原單重PCR的特異性；利用體外轉錄合成的CSFV、HPPRRSV、PEDVRNA標準品和構建的ASFV質粒分析單病

4、原單重PCR的靈敏度；根據(jù)特異性和靈敏度實驗結果分析引物設計是否符合設計預期。3、以鑒定符合設計預期的引物，參考GeXP實驗指導建立本研究的4種病原GeXP多重檢測方法，通過疫苗參考毒株及實驗室分離鑒定毒株分析4種病原GeXP多重檢測方法的特異性；通過RNA標準品和質粒分析4種病原GeXP多重檢測方法的單病原和多病原靈敏度；根據(jù)特異性和靈敏度實驗結果分析本實驗建立的4種病原GeXP多重檢測方法的可行性。4、根據(jù)實驗成果組裝GeXP多重檢