六味地黃丸干預(yù)陰虛質(zhì)的臨床觀察及其血漿代謝組學(xué)機(jī)制研究.pdf

1、背景:
　　陰虛體質(zhì)是由于先天稟賦和后天環(huán)境持續(xù)影響，在生長(zhǎng)發(fā)育和衰老過(guò)程中形成的以陰虛內(nèi)熱為主要特征的一種偏頗體質(zhì)。陰虛體質(zhì)的主要特征可以概括為以下五個(gè)方面①形體特征:體形多瘦長(zhǎng);②心理特征:性情多活潑好動(dòng)、急躁外向;③常見(jiàn)表現(xiàn):手足心熱，平時(shí)易口燥咽干，口渴喜冷飲，面色潮紅，有烘熱感，舌紅少津少苔，兩目干澀，視物模糊，眩暈耳嗚，鼻微干，唇紅微干，皮膚偏干，易生皺紋，脈象細(xì)弦或數(shù)，大便干燥，小便短，睡眠差;④發(fā)病傾向:平素易患陰

2、虧燥熱的病變，或病后易表現(xiàn)為陰虧癥狀;⑤對(duì)外界環(huán)境的適應(yīng)能力:平素不耐熱邪，不耐燥邪，耐冬不耐夏。
　　有研究發(fā)現(xiàn)，在不同健康狀態(tài)的人群中，中醫(yī)體質(zhì)分布特征存在明顯差異。已經(jīng)有相當(dāng)多的流行病學(xué)研究證實(shí)陰虛體質(zhì)與糖尿病、失眠、中風(fēng)、高血壓、骨質(zhì)疏松等疾病具有一定的相關(guān)性。陰虛質(zhì)、痰濕質(zhì)、濕熱質(zhì)、血瘀質(zhì)及氣郁質(zhì)人群亞健康狀態(tài)構(gòu)成比明顯高于非此類體質(zhì)者。氣郁質(zhì)是形成亞健康狀態(tài)的重要危險(xiǎn)因素。四種偏頗體質(zhì)（陰虛質(zhì)、濕熱質(zhì)、血瘀質(zhì)、氣郁質(zhì)）

3、發(fā)展為亞健康狀態(tài)的相對(duì)危險(xiǎn)度分別是平和質(zhì)的1.618倍、1.585倍、1.611倍、1.891倍。而平和質(zhì)則是一種保護(hù)因素。由此我們推測(cè)，陰虛質(zhì)與健康狀態(tài)有著密切的聯(lián)系，長(zhǎng)期的陰虛體質(zhì)有向病理狀態(tài)轉(zhuǎn)化的可能。因此篩選出陰虛體質(zhì)人群并提前給予干預(yù)有著未病先防的重要意義。
　　前期有研究發(fā)現(xiàn)，氣虛質(zhì)與平和質(zhì)人群血漿中對(duì)分類貢獻(xiàn)較大的特異性代謝物有11個(gè)，包括甜菜堿、脯氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺、絲氨酸、組氨酸、丙氨酸、煙酰胺核苷酸、異亮氨

4、酸、門冬氨酸、肌醇。這些差異代謝物與脂肪酸代謝、三羧酸循環(huán)、鳥(niǎo)氨酸循環(huán)、氨基酸代謝、丙酮酸代謝、糖異生、丙氨酸循環(huán)、肌醇代謝、嘌呤嘧啶代謝、氨回收、神經(jīng)遞質(zhì)傳導(dǎo)、甘氨酸和絲氨酸代謝等多個(gè)代謝通路相關(guān)。因此，我們推測(cè)，同樣作為偏頗體質(zhì)的陰虛質(zhì)也存在代謝紊亂，因此我們篩選出健康陰虛質(zhì)并納入平和質(zhì)作為對(duì)照，探索陰虛質(zhì)的代謝特征。并應(yīng)用六位地黃丸對(duì)健康陰虛體質(zhì)進(jìn)行體質(zhì)調(diào)理，探索藥物干預(yù)前后陰虛質(zhì)的代謝變化情況。
　　目的:
　　1、

5、明確六味地黃丸及生活方式調(diào)理對(duì)陰虛質(zhì)及陰虛質(zhì)人群健康狀態(tài)的影響，為應(yīng)用中醫(yī)藥手段干預(yù)中醫(yī)偏頗體質(zhì)提供科學(xué)依據(jù)。
　　2、探索陰虛質(zhì)血漿代謝組學(xué)特征及相關(guān)差異代謝產(chǎn)物。
　　3、探索六味地黃丸對(duì)陰虛質(zhì)代謝的影響及相關(guān)機(jī)制。
　　方法:
　　1、陰虛質(zhì)中藥干預(yù)研究。應(yīng)用中醫(yī)體質(zhì)量表、健康促進(jìn)生活方式量表、健康自測(cè)及體檢報(bào)告進(jìn)行健康與體質(zhì)狀況判斷，與志愿者進(jìn)行一對(duì)一面談并采用中醫(yī)四診合參，進(jìn)一步篩選健康人單純陰虛質(zhì)，并

6、將其隨機(jī)分為陰虛質(zhì)干預(yù)組及對(duì)照組。干預(yù)組應(yīng)用六味地黃丸干預(yù)1個(gè)月并結(jié)合中醫(yī)綜合體質(zhì)調(diào)理方案繼續(xù)體質(zhì)調(diào)理，對(duì)照組僅給予中醫(yī)綜合體質(zhì)調(diào)理方案。隨訪1年，觀察不同干預(yù)方式對(duì)入組對(duì)象的主要療效指標(biāo)（陰虛質(zhì)轉(zhuǎn)化分），次要評(píng)價(jià)指標(biāo)（健康促進(jìn)生活方式得分）及健康狀況的改變，通過(guò)統(tǒng)計(jì)分析主要及次要療效指標(biāo)，以明確應(yīng)用中藥調(diào)理陰虛質(zhì)的臨床療效，為應(yīng)用中醫(yī)藥手段干預(yù)中醫(yī)偏頗體質(zhì)提供科學(xué)依據(jù)。
　　2、陰虛質(zhì)與平和質(zhì)代謝組學(xué)研究。從參加論文第二章臨床實(shí)

7、驗(yàn)的人群中篩選出陰虛質(zhì)，并納入平和質(zhì)作為對(duì)照。清晨空腹抽血后提取血漿-20℃凍存，進(jìn)行代謝組學(xué)特征分析后，進(jìn)一步對(duì)其結(jié)果進(jìn)行生物信息學(xué)分析，建立代謝組差異代謝圖譜庫(kù)。
　　3、六味地黃丸干預(yù)陰虛質(zhì)前后代謝組學(xué)研究。從參加論文第二章臨床實(shí)驗(yàn)的人群中篩選出陰虛質(zhì)人群，對(duì)其用藥前后的血漿代謝組進(jìn)行比較分析，清晨空腹抽血后提取血漿-20℃凍存，進(jìn)行代謝組學(xué)特征分析后，進(jìn)一步對(duì)其結(jié)果進(jìn)行生物信息學(xué)分析，建立代謝組差異代謝圖譜庫(kù)。
　　

8、結(jié)果:
　　1.六味地黃丸干預(yù)陰虛質(zhì)的臨床觀察研究
　　通過(guò)初步調(diào)查、面談、體檢篩選出自愿入組的健康陰虛質(zhì)研究對(duì)象68例，其中2例在研究過(guò)程中退出，最后完成觀察共66例（干預(yù)組和對(duì)照組各33例）。分析結(jié)果:主要評(píng)價(jià)指標(biāo):組間比較，在入選基線時(shí)期兩組的陰虛體質(zhì)轉(zhuǎn)化分并無(wú)明顯差別(F=0.1，P=0.753)，在給予藥物干預(yù)1月后陰虛體質(zhì)轉(zhuǎn)化分即出現(xiàn)了明顯下降，與對(duì)照組相比有明顯差異(F=5.560，P=0.021),隨后的兩次

9、隨訪6月、12月兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)內(nèi)干預(yù)組與對(duì)照組相比較差異仍具有顯著性(F=4.095，P=0.047、F=5.687，P=0.020)。組內(nèi)比較，干預(yù)組干預(yù)前與1月、6月相比差異有顯著性(P=0.020、P＜0.001)，一年后干預(yù)組的陰虛體質(zhì)轉(zhuǎn)化分較干預(yù)之前明顯下降(44.60±11.75、29.36±15.39，P＜0.001)，而對(duì)照組1月與6月、12相比差異有顯著性(P=0.005、P=0.007)。而且干預(yù)組與對(duì)照組在干預(yù)方式與時(shí)

10、間上存在交互效應(yīng)(F=3.084，P=0.029)，說(shuō)明兩組的干預(yù)效果隨著時(shí)間的延長(zhǎng)變化趨勢(shì)有所不同。從干預(yù)組干預(yù)前后體質(zhì)轉(zhuǎn)化分差值來(lái)看，干預(yù)組與對(duì)照組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F=5.906、P=0.018，F(xiàn)=5.437、P=0.023，F(xiàn)=5.841，P=0.019）。組內(nèi)比較，干預(yù)組陰虛體質(zhì)轉(zhuǎn)化分呈持續(xù)性下降(F=5.144，P=0.008)，而對(duì)照組的陰虛體質(zhì)轉(zhuǎn)化分在干預(yù)一個(gè)月后仍有小幅度上升，干預(yù)6個(gè)月后才開(kāi)始出現(xiàn)下降，但下降幅度

11、仍小于干預(yù)組（12.31±16.63、3.70±13.20，P=0.023）。與對(duì)照組相比，干預(yù)1個(gè)月后，干預(yù)組在身體、臉部發(fā)熱癥狀方面有所減輕(F=4.700、P=0.034)。
　　2.六味地黃丸及生活方式干預(yù)對(duì)陰虛質(zhì)健康狀態(tài)的影響
　　干預(yù)組自測(cè)健康評(píng)分轉(zhuǎn)化分在開(kāi)始干預(yù)一個(gè)月后即有所上升，差異有顯著性(P=0.019)，而對(duì)照組則無(wú)明顯變化。從圖1-3中我們可以看到兩組的自測(cè)健康評(píng)分轉(zhuǎn)化分在開(kāi)始干預(yù)后到第6月的時(shí)間內(nèi)均

12、較前有所上升，從6月開(kāi)始至12月之間自測(cè)健康評(píng)分轉(zhuǎn)化分有小幅度下降，但是得分水平仍較干預(yù)前高。對(duì)此我們的解釋是，自測(cè)健康評(píng)分轉(zhuǎn)化分是從心理、生理、社會(huì)等三個(gè)方面綜合評(píng)估健康狀況，在體質(zhì)轉(zhuǎn)化得分、健康促進(jìn)生活方式得分變化趨勢(shì)相符的情況下（隨著健康促進(jìn)生活方式得分的升高，陰虛體質(zhì)轉(zhuǎn)化分下降），自測(cè)健康評(píng)分轉(zhuǎn)化分變化趨勢(shì)與之并不十分吻合，這提示我們健康狀況除體質(zhì)情況、生活方式之外仍有其他影響因素，如考試、人際交往困難、家人患病等壓力性事件所造

13、成的心理壓力有關(guān)。進(jìn)一步對(duì)各個(gè)維度進(jìn)行分析，(1)自測(cè)生理健康轉(zhuǎn)化分:各時(shí)間點(diǎn)組間差異無(wú)顯著性，組內(nèi)分析，干預(yù)組干預(yù)前月與1月、6月、12月相比差異具有顯著性，(P=0.017，P＜0.001，P=0.029)。對(duì)照組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)差異均無(wú)顯著性。①身體癥狀:干預(yù)組在給予藥物干預(yù)一月后身體癥狀方面即有所改善，干預(yù)前與1月、6月相比差異有顯著性(P=0.029，P=0.004)。對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)差異均無(wú)顯著性。②器官功能:干預(yù)組干預(yù)前與1月、6

14、月、12月相比差異有顯著性(P=0.012，P=0.007，P=0.001)，對(duì)照組干預(yù)前與6月、12月相比差異有顯著性(P=0.014，P=0.024)，在給予干預(yù)后干預(yù)組及對(duì)照組均顯示出了干預(yù)效果，干預(yù)組起效較對(duì)照組早。
　　3.陰虛質(zhì)與平和質(zhì)血漿1H NMR分析
　　從論文第二章臨床實(shí)驗(yàn)的健康陰虛質(zhì)人群中篩選出陰虛質(zhì)18人，并納入平和質(zhì)10人，采集清晨空腹血液樣本進(jìn)行代謝組學(xué)檢測(cè)，應(yīng)用分析軟件對(duì)圖譜進(jìn)行分析，采用PCA

15、方法對(duì)陰虛質(zhì)及平和質(zhì)樣本建模，累計(jì)計(jì)算出7個(gè)主成分，模型參數(shù)R2X=0.641，Q2X=0.256，模型分析了64.1％的原始數(shù)據(jù)。陰虛質(zhì)及平和質(zhì)之間有所分離趨勢(shì)，但仍有重合，進(jìn)一步采用PLS-DA方法進(jìn)行分析。
　　4.六味地黃丸干預(yù)組用藥前后血漿代謝組學(xué)研究
　　從論文第二章臨床觀察的陰虛質(zhì)人群中篩選出藥物干預(yù)前后陰虛質(zhì)16人，進(jìn)行用藥前后血漿代謝組學(xué)分析，應(yīng)用分析軟件對(duì)圖譜進(jìn)行分析，采用PCA方法對(duì)干預(yù)組用藥預(yù)前后樣本

16、建模，累計(jì)計(jì)算出5個(gè)主成分，模型參數(shù)R2X=0.938，Q2X=0.751，模型分析了93.8％的原始數(shù)據(jù)。干預(yù)前后樣本有分離趨勢(shì)但仍未完全分開(kāi)，進(jìn)一步采用PLS-DA模型進(jìn)行分析。最終計(jì)算出4個(gè)主成分，模型參數(shù)R2X=0.524，R2Y=0.996，Q2X=0.832。
　　5.生活方式干預(yù)陰虛質(zhì)血漿代謝組學(xué)研究
　　從論文第二章臨床觀察的陰虛質(zhì)人群中篩選出藥物干預(yù)前后陰虛質(zhì)20人，進(jìn)行用藥前后血漿代謝組學(xué)分析，應(yīng)用分析軟

17、件對(duì)圖譜進(jìn)行分析，采用PCA方法對(duì)干預(yù)組用藥預(yù)前后樣本建模，累計(jì)計(jì)算出8個(gè)主成分，模型參數(shù)R2X=0.927，Q2X=0.705，模型分析了92.7％的原始數(shù)據(jù)。
　　結(jié)論:
　　1.六味地黃丸及生活方式都可以起到改善陰虛質(zhì)的相關(guān)癥狀，對(duì)生理健康也可以起到調(diào)理作用，但是生活方式的調(diào)理需要長(zhǎng)期堅(jiān)持才能起效，聯(lián)合藥物調(diào)理起效更快，效果更好。
　　2.與平和質(zhì)相比陰虛質(zhì)血漿內(nèi)與能量、脂肪代謝、三羧酸循環(huán)相關(guān)的氨基酸、脂類、糖

18、等代謝產(chǎn)物明顯升高，可能為陰虛質(zhì)內(nèi)熱表現(xiàn)、形體瘦長(zhǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　3.與平和質(zhì)相比陰虛質(zhì)血漿內(nèi)涉及到神經(jīng)傳遞的氨基酸水平有所上升，提示陰虛體質(zhì)有可能存在某種程度的神經(jīng)細(xì)胞抑制與興奮功能的失衡，而這種失衡有可能是陰虛質(zhì)喜動(dòng)惡靜，性格活潑開(kāi)朗、失眠等表現(xiàn)的機(jī)制之一。
　　4.在給予六味地黃干預(yù)后陰虛質(zhì)血漿中與三羧酸循環(huán)相關(guān)的脂類、蛋白、氨基酸、糖類均有所降低。說(shuō)明六味地黃丸對(duì)陰虛質(zhì)的能量代謝紊亂有一定的調(diào)節(jié)作用，從而對(duì)于陰虛的