不同數(shù)量脂肪干細(xì)胞對(duì)不同劑量野百合堿誘發(fā)的大鼠肺動(dòng)脈高壓的影響.pdf

1、背景：
　　我們課題組先前成功運(yùn)用野百合堿（MCT）誘導(dǎo)建立肺動(dòng)脈高壓（PAH）大鼠模型并發(fā)現(xiàn)脂肪干細(xì)胞（ADSCs）移植能夠顯著降低PAH大鼠的平均肺動(dòng)脈壓（mPAP）、改善肺血管和右心室重構(gòu)。但目前對(duì)于治療PAH所需的合適的ADSCs數(shù)量、干預(yù)時(shí)間與治療療程尚未完全清楚。
　　目的：
　　研究不同數(shù)量的ADSCs移植對(duì)不同劑量MCT誘導(dǎo)的PAH大鼠的治療作用，探索ADSCs移植治療的最佳細(xì)胞數(shù)目、干預(yù)時(shí)機(jī)及治療時(shí)間

2、。
　　方法：
　　(1)以膠原酶消化法從SD大鼠腹股溝皮下脂肪組織分離培養(yǎng)出ADSCs；流式細(xì)胞儀鑒定其表型；成脂、成骨誘導(dǎo)分化鑒定其多向分化潛能；按以下方案經(jīng)腹腔一次性注射相應(yīng)劑量的MCT誘導(dǎo)建立PAH和經(jīng)左頸外靜脈移植相應(yīng)數(shù)量的ADSCs，在相應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)用右心導(dǎo)管法檢測(cè)mPAP和用稱重法測(cè)量右心室肥厚指數(shù)（RVHI）。
　　(2)分四個(gè)部分:
　　1.不同數(shù)量ADSCs干預(yù)PAH大鼠：36只SD大鼠隨機(jī)分為

3、正常對(duì)照組(NC組)、PAH組和各個(gè)ADSCs組。PAH和ADSCs組予40mg/kg MCT，NC組予相應(yīng)體積的生理鹽水；各個(gè)ADSCs組于MCT注射后7天移植ADSCs，數(shù)量分別為0.53106個(gè)(A1組)、1.03106個(gè)(A2組)、3.03106個(gè)(A3組)和5.03106個(gè)（A4組），NC和PAH組予等體積生理鹽水。各組n均為6，分別于MCT注射后4周檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。
　　2.不同數(shù)量ADSCs干預(yù)正常SD大鼠:25只SD

4、大鼠隨機(jī)分為NC組和各個(gè)ADSCs組。各組大鼠予一次性腹腔注射相應(yīng)體積的生理鹽水，7d后各個(gè)ADSCs組移植ADSCs，數(shù)量分別為：0.53106個(gè)（N-A1組）、1.03106個(gè)（N-A2組）、3.03106個(gè)(N-A3)和5.03106個(gè)(N-A4)，NC組予等體積生理鹽水；各組n均為5，分別于頸外靜脈注射后3周檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。
　　3.1.03106 ADSCs干預(yù)不同劑量MCT誘導(dǎo)的PAH大鼠：70只SD大鼠隨機(jī)分為NC組、

5、不同劑量MCT誘導(dǎo)的PAH組和ADSCs組。PAH和ADSCs組分別予MCT20mg/kg（P-20和A-20組）、30mg/kg（P-30和A-30組）和40mg/kg（P-40和A-40組）。ADSCs組在MCT注射后7天移植1.03106ADSCs，其余各組予等體積生理鹽水。MCT注射后4周和8周檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)，各組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)n均為5。
　　4.1.03106 ADSCs不同移植時(shí)間、不同治療周期干預(yù)PAH大鼠：48只SD大鼠

6、隨機(jī)分為NC組(NC-4w和NC-5w組，n均為8)、PAH組（P-4w和P-5w組，n均為8）和ADSCs組。PAH和ADSCs組予40mg/Kg MCT，NC組予相應(yīng)體積的生理鹽水。ADSCs組分別于MCT注射后1天（A1d-4w組，n=8）、7天（A7d-4w組，n=8）和14天（A14d-4w和A14d-5w組，n均為8）移植1.03106 ADSCs。各組n均為6，NC-5w、P-5w和A14d-5w組于MCT注射后5周檢測(cè)各

7、項(xiàng)指標(biāo)，其余各組于MCT注射后4周檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。
　　結(jié)果：
　　1. ADSCs CD29和CD90陽(yáng)性，CD34、CD45和CD31陰性；成脂和成骨誘導(dǎo)后胞漿內(nèi)分別出現(xiàn)橘紅色脂滴和棕紅色鈣化顆粒。
　　2.①與NC組相比，PAH、A1、A3和A4組的mPAP和RVHI均升高，A2組的RVHI升高而mPAP無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與PAH組相比，A2組的mPAP降低而RVHI差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; PAH、A1、A3、A4四組間的

8、mPAP和RVHI差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與A1組相比，A2組的mPAP和RVHI差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與A2組相比，A3、A4組的mPAP升高而RVHI差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　②各組間mPAP和RVHI差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　③NC、P-20和A-20組之間在4周、8周時(shí)mPAP和RVHI差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與NC組相比，P-30和A-30組的mPAP和RVHI在4周時(shí)升高而8周時(shí)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P-30和A-30兩組之間相比在

9、4周和8周時(shí)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與NC組相比，P-40和A-40組的mPAP和RVHI在4周時(shí)升高，8周時(shí)P-40和A-40組全部死亡；與P-40組相比，A-40組的mPAP在4周時(shí)下降而RVHI無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　④與NC組相比，P-4w、A1d-4w組的mPAP和RVHI均有不同程度的升高，A7d-4w和A14d-4w組的RVHI升高而mPAP差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與P-4w組相比，A7d-4w和A14d-4w組的mPAP降低而RVH

10、I差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與A1d-4w組相比，A7d-4w的mPAP降低而RVHI差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，A14d-4w組的mPAP和RVHI差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；P-4w和A1d-4w組之間以及A7d-4w和A14d-4w組之間相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與NC組相比，P-5w和A14d-5w組的mPAP和RVHI均有不同程度的升高；與P-5w組相比，A14d-5w組的mPAP和RVHI明顯降低。
　　結(jié)論：
　　1.一次性腹腔注射40mg