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文檔簡介
1、分類號:密級:UDC:學號:406521611271南昌大學碩士研究生學位論文miR200c提高紫杉醇及吉非替尼對人肺癌提高紫杉醇及吉非替尼對人肺癌A549細胞細胞抑制作用的研究抑制作用的研究miR200cimprovepaclitaxelgefitinibinhibitionintheA549humanlungcancercell尹燕軍尹燕軍培養(yǎng)單位(院、系):南昌大學第一附屬醫(yī)院指導教師姓名、職稱:邱峰主任醫(yī)師申請學位的學科門類:醫(yī)
2、學學科專業(yè)名稱:腫瘤學論文答辯日期:2014年6月答辯委員會主席:徐方云評閱人:吳建兵周榮偉2014年6月摘要II摘要目的:目的:1、確定miR200c轉染肺癌A549細胞最佳轉染濃度。2、觀察上調miR200c后,紫杉醇及吉非替尼對人肺癌A549細胞增殖及凋亡的變化。3、探討miR200c上調后,紫杉醇聯(lián)合吉非替尼是否具有協(xié)同作用。方法:方法:1、轉染實驗及PCR檢測:實驗分為轉染miR200cmimics組為實驗組,轉染miR200
3、cNC為陰性對照組,肺癌A549細胞為空白對照組;同時設置三個轉染濃度20nm、50nm及100nm。通過脂質體lipo2000轉染72小時后,SYBRGreenRealtimePCR檢測各濃度轉染后miR200c表達變化及其下游ZEB1的表達變化,確定最佳轉染濃度。2、細胞增殖實驗:采用最佳濃度轉染細胞,將轉染組及陰性對照組各分成三組:紫杉醇單藥組(016nmolL)、吉非替尼單藥組(040umolL)、兩藥聯(lián)合組。通過MTT法測定m
4、iR200c轉染對各組細胞的增殖變化并計算各組的半數(shù)抑制率(IC50)。3、細胞凋亡實驗:將轉染組及陰性對照組各分成四組,分別加入紫杉醇IC50、吉非替尼IC50、兩藥聯(lián)合(紫杉醇IC50吉非替尼IC50)及不加藥物.。72小時后采用流式細胞儀檢測miR200c轉染對細胞凋亡影響。結果:結果:1、miR200c轉染后,20nm組miR200c表達量上調1365.29倍;50nm組miR200c表達量上調16440.88倍;100nm組m
5、iR200c表達量上調4352.11倍,分別與轉染組與陰性對照組和空白對照組相比,P值均0.01。20nm組ZEB1表達量下調24%;50nm組ZEB1表達量下調51%;100nm組ZEB1表達量下調34%,分別與轉染組與陰性對照組和空白對照組相比,P值均0.05。因此,50nm為最佳轉染濃度。2、轉染miR200cNC組與轉染miR200cmimics組對比,紫杉醇單藥的IC50為8.40vs6.09nmolL,P0.05;吉非替尼單
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