視蛋白基因3（OPN3）對(duì)人肺癌A549細(xì)胞紫杉醇耐藥性作用機(jī)制的初步研究.pdf

1、肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重危害人類健康，以非小細(xì)胞肺癌多見，而化學(xué)治療是其主要的治療手段。但隨著化療藥物的廣泛使用，腫瘤耐藥性也不斷出現(xiàn)，嚴(yán)重影響了治療效果。耐藥性是由基因決定的，因此，發(fā)現(xiàn)和研究腫瘤耐藥性相關(guān)基因及其作用的分子機(jī)制，有助于進(jìn)行針對(duì)性的臨床治療，為研究新的藥物作用靶點(diǎn)和治療方法提供依據(jù)，其已成為當(dāng)前腫瘤防治研究的重點(diǎn)課題。 本室前期研究表明，與淡色庫蚊對(duì)殺蟲劑抗性相關(guān)視蛋白基因高度同源的人視蛋白基因3(Op

2、sin3,OPN3)與人肺癌A549細(xì)胞紫杉醇耐藥性相關(guān)，推測其可能作為G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)成員。參與了肺癌A549細(xì)胞對(duì)紫杉醇的耐藥機(jī)制。 本研究采用G蛋白偶聯(lián)受體信號(hào)通路基因芯片，對(duì)A549紫杉醇敏感細(xì)胞轉(zhuǎn)染伽及其空載體對(duì)照組、A549PTX紫杉醇耐藥細(xì)胞干涉OPN3及其空載體對(duì)照組共4種細(xì)胞系，紫杉醇處理前后2種狀態(tài)，共8組樣品進(jìn)行高通量篩選，以研究OPN3對(duì)其他G蛋白偶聯(lián)受體及GPCR下游信號(hào)通路的影響；采用定量P

3、CR及Western Blot驗(yàn)證目的基因及蛋白質(zhì)表達(dá)差異，研究其對(duì)A549細(xì)胞紫杉醇耐藥影響的可能機(jī)制。結(jié)果表明，OPN3可以抑制c-Jun表達(dá)，從而降低下游基因轉(zhuǎn)錄、抑制細(xì)胞增殖，增加腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物的敏感性。 同時(shí)，本研究采用使用annexin V/propidium iodide(PI)雙染，流式細(xì)胞儀結(jié)合熒光顯微鏡對(duì)芯片實(shí)驗(yàn)樣本細(xì)胞進(jìn)行凋亡檢測。結(jié)果表明，OPN3相對(duì)表達(dá)水平與A549細(xì)胞在紫杉醇處理下的凋亡水平正相關(guān)，