晚期糖基化終產(chǎn)物受體特異性小干擾RNA對(duì)致炎因子生成的抑制作用.pdf

1、目的：探討晚期糖基化終產(chǎn)物受體(the receptor of advanced glycation endproducts，RAGE)特異性小干擾RNA(small interfering RNA，siRNA)在原代大鼠肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cells，HSCs）中及肝纖維化(hepatic fibrosis，HF)大鼠體內(nèi)對(duì)致炎因子生成的影響。
　　方法：構(gòu)建RAGE特異性siRNA表達(dá)載體pAKD-G

2、R126，將其轉(zhuǎn)染入原代大鼠HSCs，以空白組和轉(zhuǎn)染非特異性siRNA表達(dá)載體pAKD-NC組為對(duì)照，分別應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot檢測(cè)各組原代HSCs中RAGE、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)和白細(xì)胞介素-6(interleukin-6，IL-6) mRNA及蛋白的表達(dá);制備CCl4誘導(dǎo)的SD大鼠HF模型，將pAKD-GR126經(jīng)尾靜脈注射導(dǎo)入SD大鼠體內(nèi)，以正常對(duì)照

3、組、模型組和pAKD-NC組為對(duì)照，應(yīng)用熒光顯微鏡觀察大鼠肝組織內(nèi)綠色熒光蛋白(green fluorescent protein，GFP)示蹤的pAKD-GR126和pAKD-NC的表達(dá)，應(yīng)用放射免疫法檢測(cè)各組實(shí)驗(yàn)大鼠血清中TNF-α和IL-6的濃度。
　　結(jié)果：轉(zhuǎn)染pAKD-GR126的原代HSCs的RAGE mRNA和蛋白的表達(dá)水平分別下調(diào)為空白組和pAKD-NC組的（42.32±6.16）％、（43.24±7.50）％和(

4、51.06±13.79)％、（47.94±5.36)％(F=7.791,36.513;P均＜0.05);TNF-α mRNA和蛋白的表達(dá)水平分別下調(diào)為空白組和pAKD-NC組的（38.68±4.11）％、(39.50±3.29)％和（57.00±6.07）％、（56.01±5.27）％(F=474.568，123.500;P均＜0.05);IL-6 mRNA和蛋白的表達(dá)水平分別下調(diào)為空白組和pAKD-NC組的（47.46±5.52）％、

5、(45.94±4.55)％和（48.30±3.26）％、（50.50±3.61）％(F=203.463，320.555;P均＜0.05）。用RAGE特異性siRNA干預(yù)HF大鼠6 w后，各治療組及NS組的肝臟切片在熒光顯微鏡下均能見(jiàn)到示蹤的GFP陽(yáng)性綠色熒光;pAKD-GR126小劑量治療組、pAKD-GR126中劑量治療組和pAKD-GR126高劑量治療組的血清TNF-α、IL-6水平分別降至HF模型組的（76.68±1.83）％、（