雞Ⅱ型膠原誘導(dǎo)膠原性關(guān)節(jié)炎大鼠腸系膜淋巴結(jié)主要輔助性T細(xì)胞亞群的免疫平衡.pdf

1、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種慢性、炎癥、系統(tǒng)性的自身免疫性疾病。T細(xì)胞在RA的病理機(jī)制及病程進(jìn)展中起重要作用，T淋巴細(xì)胞的主要亞群，輔助性T細(xì)胞1(Helper T cell 1，Th1)、Th2、Th17和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cells，Treg)因其具有介導(dǎo)炎癥、細(xì)胞生長(zhǎng)和激活的生物學(xué)功能，在RA的病程中發(fā)揮著極其重要的作用。由于RA的發(fā)病原因和病理機(jī)制還遠(yuǎn)未被闡述清楚，目

2、前還沒(méi)有令人滿意的療法。有文獻(xiàn)報(bào)道動(dòng)物關(guān)節(jié)蛋白類，特別是II型膠原蛋白(type II collagen，CII)，在T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)中起關(guān)鍵作用，雞II型膠原(chicken type II collagen，CCII)是一類由雞胸部軟骨提取出來(lái)的蛋白，這類蛋白可以誘導(dǎo)自身免疫性疾病的免疫耐受從而達(dá)到治療作用。Trentham首先報(bào)道了CII治療28例RA患者(均未服免疫抑制劑)的隨機(jī)對(duì)照臨床研究，發(fā)現(xiàn)口服CII后，患者的關(guān)節(jié)腫脹

3、指數(shù)和壓痛指數(shù)、15m行走時(shí)間的改善程度明顯優(yōu)于安慰劑組。本課題組的早期研究發(fā)現(xiàn)：CCII對(duì)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎(adjuvant arthritis，AA)具有免疫調(diào)節(jié)作用，可以降低淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)、降低炎性細(xì)胞因子IL-2的水平并降低腹腔巨噬細(xì)胞分泌IL-1的功能，從而改善大鼠AA癥狀。進(jìn)而本課題組分別在包含236名受試者和503名受試者的II期和III期的CCII臨床試驗(yàn)中得出，與甲氨蝶呤(Methotrexate，MTX)組比較，

4、CCII有治療RA的效果，且不良反應(yīng)要明顯低于MTX組。本實(shí)驗(yàn)基于本課題組以往的研究，以腸系膜淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞(mesentric lymph node lymphocytes，MLNLs)為研究對(duì)象，研究CCII如何誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞亞群的免疫平衡和相關(guān)作用。
　　 目的：
　　 根據(jù)CCII對(duì)CIA大鼠的足爪腫脹、評(píng)分、關(guān)節(jié)滑膜和腸系膜淋巴結(jié)病理形態(tài)學(xué)的改善作用，觀察CCII對(duì)CIA大鼠MLNLs的IL-2、IL-4

5、、IL-17和TGF-β水平的影響;分析關(guān)節(jié)腫脹度與細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-17和TGF-β水平的相關(guān)性；在整體、器官、細(xì)胞水平上，研究CCII對(duì)大鼠CIA的作用。以本課題組以往的研究為基礎(chǔ)，以CIA發(fā)病的免疫細(xì)胞MLNLs為研究突破口，研究抗、促炎性細(xì)胞及細(xì)胞因子在CIA發(fā)病中的可能機(jī)制，進(jìn)一步研究CCII對(duì)CIA大鼠MLNcs中主要T細(xì)胞亞群的免疫調(diào)節(jié)作用。
　　 方法：
　　 大鼠足跖、尾根部、背部皮內(nèi)多

6、點(diǎn)注射雞II型膠原(chicken type II collagen，CCII)乳劑制備CIA模型，致炎后眼眶取血檢測(cè)II型膠原抗體，將大鼠分為5組：正常組(II型膠原抗體陰性)；模型組(II型膠原抗體陽(yáng)性)；CCII(10、20、40 μg·kg-1·d-1)劑量組(II型膠原抗體陽(yáng)性)。 CCII(10、20、40 μg·kg-1·d-1)灌胃給藥(intragastric administration，ig)(d14-d21)。足

7、容積法測(cè)量繼發(fā)側(cè)足腫脹、進(jìn)行多發(fā)性關(guān)節(jié)評(píng)分；光學(xué)顯微鏡觀察關(guān)節(jié)滑膜及腸系膜淋巴結(jié)的病理變化；活化小鼠脾細(xì)胞增殖法檢測(cè)IL-2水平；酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)檢測(cè)大鼠MLNcs的IL-4、IL-17和TGF-β的水平；用流式細(xì)胞技術(shù)分析MLNcs中CD4+CD25+Treg和Th17細(xì)胞的比例。
　　 結(jié)果：
　　 1.CCII緩解CIA大鼠關(guān)節(jié)腫脹

8、、降低關(guān)節(jié)評(píng)分、改善腸系膜淋巴結(jié)和關(guān)節(jié)滑膜的組織的炎癥
　　 CIA大鼠免疫注射后26天左右炎癥反應(yīng)達(dá)到高峰，光鏡下可見(jiàn)滑膜組織中滑膜細(xì)胞增生明顯、層次增多、排列紊亂，滑膜下層纖維組織增生，血管擴(kuò)張、充血，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；腸系膜淋巴結(jié)中副皮質(zhì)區(qū)明顯擴(kuò)大；髓質(zhì)內(nèi)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；淋巴結(jié)呈特異性濾泡增生。CCII（10、20、40 μg·kg-1·d-1）治療給藥（ig，d18-d25）可明顯抑制CIA大鼠的關(guān)節(jié)腫脹，降低多發(fā)性關(guān)節(jié)炎指數(shù)

9、，改善CIA大鼠關(guān)節(jié)滑膜和腸系膜淋巴結(jié)炎癥和病理變化。
　　 2.CCII抑制炎性細(xì)胞因子IL-2和IL-17的分泌，升高抗炎因子IL-4和TGF-β水平，誘導(dǎo)細(xì)胞的免疫平衡
　　 CCII（10、20、40 μg·kg-1·d-1）治療給藥（ig，d18-d25）可降低CIA大鼠過(guò)高的IL-2和IL-17水平，上調(diào)CIA大鼠MLNLs分泌的過(guò)低的IL-4和TGF-β水平，并且流式分析結(jié)果表明了CIA大鼠的腸系膜淋巴結(jié)中

10、Th17細(xì)胞的比例比正常大鼠高，而Treg細(xì)胞要比正常大鼠比例低，這說(shuō)明了CIA大鼠腸系膜淋巴結(jié)中炎性細(xì)胞大量活化增殖，抗炎細(xì)胞被抑制，CCII治療給藥可以降低Th17細(xì)胞在CIA大鼠腸系膜淋巴結(jié)的活化增殖。CCII抑制了CIA大鼠MLNLs分泌IL-2和IL-17，促進(jìn)了CIA大鼠MLNLs分泌IL-4和TGF-β，誘導(dǎo)了Th1/Th2和Th17/Treg的免疫平衡。
　　 結(jié)論：
　　 1.CCII治療給藥可明顯抑制

11、CIA大鼠的關(guān)節(jié)腫脹，改善CIA大鼠關(guān)節(jié)滑膜和腸系膜淋巴結(jié)炎癥和病理變化，不同程度地下調(diào)MLNLs分泌的炎性細(xì)胞因子IL-2和IL-17水平，上調(diào)抗炎細(xì)胞因子IL-4和TGF-β水平。相關(guān)性分析顯示，CCII緩解CIA大鼠關(guān)節(jié)腫脹與腸系膜淋巴結(jié)的炎癥，與其降低MLNLs分泌的炎性細(xì)胞因子IL-2和IL-17水平、升高抗炎細(xì)胞因子IL-4和TGF-β水平密切相關(guān)。
　　 2.CCII治療給藥降低CIA大鼠過(guò)高的IL-2和IL-17