自噬在貝伐單抗誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌死亡中的作用.pdf

1、背景：
　　肺癌是危害人類生命健康的最常見的惡性腫瘤之一。近年來，肺癌發(fā)病及死亡率迅速上升，目前已成為男性惡性腫瘤第一位，同時(shí)女性發(fā)病也呈不斷增長(zhǎng)趨勢(shì)。環(huán)境的惡化、吸煙、酗酒及各種職業(yè)病的出現(xiàn)，都成為了肺癌發(fā)病率和死亡率持續(xù)上升的原因。
　　肺癌病理類型分為小細(xì)胞癌(SCLC)和非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)，其中NSCLC占肺癌總體的80％。為治療的重中之重。傳統(tǒng)的肺癌治療方法是以手術(shù)治療為主，放化療、生物治療為輔的綜合治療。

2、但因肺癌具有起病隱襲、早期診斷率低等特點(diǎn)，大多數(shù)患者在確診時(shí)已達(dá)中晚期，失去了外科治療的最佳時(shí)機(jī)。
　　在腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移過程中，新生血管的出現(xiàn)是必不可少的。隨著研究的深入，相關(guān)學(xué)者在腫瘤新生血管與靶向治療方面有了新的研究結(jié)果。其中，大量研究證明血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)在NSCLC組織中高表達(dá)，這是NSCLC發(fā)生、發(fā)展的重要標(biāo)志。于是，作為重組人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子單克隆抗體的貝伐單抗(Bevacizumab)，成為了新的抗血管藥

3、物。相關(guān)試驗(yàn)已經(jīng)證明貝伐單抗對(duì)于肝細(xì)胞移植瘤以及鼻咽癌移植瘤的新生血管生成及生長(zhǎng)具有抑制作用，但單獨(dú)應(yīng)用時(shí)往往不能達(dá)到理想效果，且具體機(jī)制尚不明確。
　　自噬是真核細(xì)胞的生命特征之一，是細(xì)胞通過溶酶體降解衰老及受損的細(xì)胞器和大分子蛋白，為自身提供新合成的小分子底物，維持細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)，幫助其應(yīng)對(duì)惡劣的生存環(huán)境的過程。有研究表明，缺血缺氧可誘導(dǎo)自噬產(chǎn)生。因此，腫瘤細(xì)胞在抗血管生成治療時(shí)可能會(huì)誘發(fā)自噬，從而起到自身保護(hù)作用。
　　目

4、的：
　　研究自噬抑制劑3-MA在血管抑制藥物貝伐單抗誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞死亡中的作用
　　方法：
　　MTT法分別描繪貝伐單抗與3-MA作用于肺癌A549細(xì)胞時(shí)的細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，并計(jì)算貝伐單抗對(duì)A549細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(Ic50)及3-MA對(duì)A549細(xì)胞的抑制濃度Ic10;AnnexinV-FITC/PI雙染色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)A549細(xì)胞凋亡率;吖啶橙(A.O)與丹酰戊二胺(MDC)分別染色對(duì)照組、貝伐單抗組、

5、3-MA組及聯(lián)合用藥組細(xì)胞后，在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞自噬與凋亡狀態(tài);蛋白免疫印跡雜交（westernblot）檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白LC3的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　流式細(xì)胞儀測(cè)得貝伐單抗組、3-MA組及聯(lián)合用藥組細(xì)胞凋亡率分別為(20.82±0.41)％、（4.1±0.12）％及(36.36±0.87)％;貝伐單抗組細(xì)胞分別經(jīng)MDC及3-MA染色后，細(xì)胞中出現(xiàn)大量自噬空泡，而在加入3-MA聯(lián)合作用后，自噬空泡現(xiàn)象被不同程度抑制