自噬在貝伐單抗誘導非小細胞肺癌死亡中的作用.pdf

1、背景：
　　肺癌是危害人類生命健康的最常見的惡性腫瘤之一。近年來，肺癌發(fā)病及死亡率迅速上升，目前已成為男性惡性腫瘤第一位，同時女性發(fā)病也呈不斷增長趨勢。環(huán)境的惡化、吸煙、酗酒及各種職業(yè)病的出現(xiàn)，都成為了肺癌發(fā)病率和死亡率持續(xù)上升的原因。
　　肺癌病理類型分為小細胞癌(SCLC)和非小細胞肺癌(NSCLC)，其中NSCLC占肺癌總體的80％。為治療的重中之重。傳統(tǒng)的肺癌治療方法是以手術治療為主，放化療、生物治療為輔的綜合治療。

2、但因肺癌具有起病隱襲、早期診斷率低等特點，大多數(shù)患者在確診時已達中晚期，失去了外科治療的最佳時機。
　　在腫瘤的生長、轉移過程中，新生血管的出現(xiàn)是必不可少的。隨著研究的深入，相關學者在腫瘤新生血管與靶向治療方面有了新的研究結果。其中，大量研究證明血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)在NSCLC組織中高表達，這是NSCLC發(fā)生、發(fā)展的重要標志。于是，作為重組人血管內(nèi)皮生長因子單克隆抗體的貝伐單抗(Bevacizumab)，成為了新的抗血管藥

3、物。相關試驗已經(jīng)證明貝伐單抗對于肝細胞移植瘤以及鼻咽癌移植瘤的新生血管生成及生長具有抑制作用，但單獨應用時往往不能達到理想效果，且具體機制尚不明確。
　　自噬是真核細胞的生命特征之一，是細胞通過溶酶體降解衰老及受損的細胞器和大分子蛋白，為自身提供新合成的小分子底物，維持細胞的穩(wěn)態(tài)，幫助其應對惡劣的生存環(huán)境的過程。有研究表明，缺血缺氧可誘導自噬產(chǎn)生。因此，腫瘤細胞在抗血管生成治療時可能會誘發(fā)自噬，從而起到自身保護作用。
　　目

4、的：
　　研究自噬抑制劑3-MA在血管抑制藥物貝伐單抗誘導非小細胞肺癌A549細胞死亡中的作用
　　方法：
　　MTT法分別描繪貝伐單抗與3-MA作用于肺癌A549細胞時的細胞生長曲線，并計算貝伐單抗對A549細胞的半數(shù)抑制濃度(Ic50)及3-MA對A549細胞的抑制濃度Ic10;AnnexinV-FITC/PI雙染色流式細胞術檢測A549細胞凋亡率;吖啶橙(A.O)與丹酰戊二胺(MDC)分別染色對照組、貝伐單抗組、

5、3-MA組及聯(lián)合用藥組細胞后，在熒光顯微鏡下觀察細胞自噬與凋亡狀態(tài);蛋白免疫印跡雜交（westernblot）檢測自噬相關蛋白LC3的表達變化。
　　結果：
　　流式細胞儀測得貝伐單抗組、3-MA組及聯(lián)合用藥組細胞凋亡率分別為(20.82±0.41)％、（4.1±0.12）％及(36.36±0.87)％;貝伐單抗組細胞分別經(jīng)MDC及3-MA染色后，細胞中出現(xiàn)大量自噬空泡，而在加入3-MA聯(lián)合作用后，自噬空泡現(xiàn)象被不同程度抑制