Rho激酶抑制劑法舒地爾對人晶狀體上皮細(xì)胞增殖、遷移及細(xì)胞外基質(zhì)合成的影響.pdf

1、背景與目的:
　　白內(nèi)障術(shù)后晶狀體囊殘留的晶狀體上皮細(xì)胞(lensepithelialcells，LECs)發(fā)生增殖、遷移、膠原沉積及晶狀體纖維再生導(dǎo)致后囊膜混濁（posteriorcapsularopacification，PCO）即后發(fā)性白內(nèi)障。后發(fā)性白內(nèi)障是白內(nèi)障手術(shù)后導(dǎo)致患者視力再次下降的最常見的一個(gè)遠(yuǎn)期并發(fā)癥。白內(nèi)障術(shù)中的機(jī)械性創(chuàng)傷及術(shù)后的炎癥反應(yīng)等均可引起房水中大量細(xì)胞因子的分泌及釋放，這些細(xì)胞因子作為細(xì)胞外的刺激信號

2、與晶狀體上皮細(xì)胞膜上的表面受體結(jié)合后導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞核內(nèi)相應(yīng)基因轉(zhuǎn)錄活化。在此過程中，胞內(nèi)的信號傳導(dǎo)通路對PCO的形成起著重要的作用。相關(guān)研究表明Rho激酶可以通過激活下游的關(guān)鍵靶效應(yīng)分子Rho激酶來調(diào)節(jié)晶狀體上皮細(xì)胞的多種生物學(xué)行為。法舒地爾(fasudil)是目前在臨床及實(shí)驗(yàn)中最常用的Rho/Rho激酶信號通路的選擇性抑制劑，不僅能抑制細(xì)胞內(nèi)游離鈣的活動(dòng)，而且抑制細(xì)胞內(nèi)肌球蛋白輕鏈(MLC)磷酸化的水平，從而抑制細(xì)胞骨架的合

3、成。關(guān)于法舒地爾對晶狀體上皮細(xì)胞的作用機(jī)制目前報(bào)道尚少，本實(shí)驗(yàn)通過使用不同濃度法舒地爾干預(yù)體外培養(yǎng)人晶狀體上皮細(xì)胞，選擇不同時(shí)間點(diǎn)，分別觀察其對細(xì)胞增殖、遷移及細(xì)胞外基質(zhì)合成方面的影響，并探討其作用機(jī)制。
　　實(shí)驗(yàn)方法:
　　體外培養(yǎng)人晶狀體上皮細(xì)胞HLE-B3，分為以下5組:對照組、藥物處理組，藥物處理組法舒地爾的濃度分別為10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L。作用12、24和48h采用C

4、CK-8法檢測細(xì)胞增殖。Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移能力。ELISA法檢測各組細(xì)胞上清Ⅰ型膠原(COLI)、纖維連接蛋白(FN)及細(xì)胞內(nèi)α-SMA的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　CCK-8法顯示，經(jīng)法舒地爾干預(yù)后細(xì)胞的增殖受到抑制，呈明顯的濃度依賴性和時(shí)間依賴性(P＜0.05)。Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)顯示，48小時(shí)后對照組細(xì)胞穿過聚碳酸酯膜的細(xì)胞數(shù)為(29.20±1.28)個(gè)，藥物處理組(法舒地爾10μmol

5、/L、20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L)遷移的細(xì)胞數(shù)分別為（24.40±1.33、17.00±1.10、14.60±0.68、6.60±1.29）個(gè)，不同濃度的法舒地爾對HLE-B3細(xì)胞的遷移均有抑制作用(P＜0.05)。不同濃度法舒地爾干預(yù)組細(xì)胞上清液中纖維連接蛋白(FN)和I型膠原蛋白(COLI)含量及細(xì)胞內(nèi)骨架蛋白α-SMA的表達(dá)明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
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