安胰顆粒對重癥急性胰腺炎大鼠NF-κB活化及細(xì)胞因子表達(dá)的影響.pdf

1、目的:本課題主要通過研究安胰腺顆粒對重癥急性胰腺炎大鼠NF-κB信號通路及相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的影響，從信號傳導(dǎo)分子水平上闡明安胰顆粒在重癥急性胰腺炎(Severe acute pancreatitis，SAP)治療過程中的作用機(jī)制，為安胰顆粒的臨床應(yīng)用提供現(xiàn)代理論支撐和基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，并為中醫(yī)藥治療重癥胰腺炎的研究提出可借鑒的研究思路，探索中醫(yī)藥在防治重癥急性胰腺炎方面的方法及作用機(jī)制。
　　方法:選取120只體重200-250g健康

2、雄性清潔級SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)研究對象。將120只SD大鼠隨機(jī)分為正常組（N組）、模型組(SAP組)、安胰顆粒組（A組）和IL-10組（Ⅰ組）共4組，每組30只，各組又隨機(jī)分為3h、6h、12h三個(gè)亞組，每個(gè)亞組10只。正常組（N組）正常進(jìn)食進(jìn)水，給予腹腔內(nèi)注射生理鹽水(0.25 ml/100g); SAP組造模前12h禁食，不禁水，12h后給予腹腔內(nèi)注射6％的左旋精氨酸(L-Arginine)溶液(150mg/100g)，每小時(shí)一次，共三

3、次，誘導(dǎo)SAP的發(fā)生。Ⅰ組給予腹腔內(nèi)注射10000U人重組白介素10（rhIL-10）預(yù)處理后再予腹腔內(nèi)注射6％的左旋精氨酸（L-Arginine）溶液誘導(dǎo)SAP的發(fā)生。A組造模前給予安胰顆粒水溶液（8g/kg，相當(dāng)于臨床每天推薦劑量的5倍）灌胃，每天一次，共三次，再予腹腔內(nèi)注射6％的左旋精氨酸（L-Arginine）溶液誘導(dǎo)SAP的發(fā)生。在SAP組第三次腹腔內(nèi)注射6％的左旋精氨酸（L-Arginine）溶液誘導(dǎo)SAP后，各組大鼠分別予

4、3h，6h，12h時(shí)給予1％戊巴比妥麻醉，經(jīng)腹主動脈采血后將其處死并解剖，迅速取出胰腺組織，部分胰腺組織用體積分?jǐn)?shù)為4％的中性甲醛固定，用于胰腺組織病理學(xué)評分;部分胰腺組織放入RNA store樣本保存液中保存，并在-80℃冰箱中保存，待提取RNA行real-time PCR檢測;分別測定胰腺組織中NF-κB mRNA、TNF-α mRNA、IL-1β mRNA水平;采集的腹主動脈血液凝固后在4℃條件下以3000r/min，離心10mi

5、n，提取血清于-30℃保存，待行酶聯(lián)吸附免疫法(Elisa)測定血清TNF-α、IL-1β水平，并對上述所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　結(jié)果:1.與N組比較，SAP組大鼠胰腺組織病理變化明顯，12h時(shí)最為明顯，病理學(xué)評分顯著增高(P＜0.01);與SAP組比較，A組大鼠胰腺組織病理變化明顯減輕，病理學(xué)評分明顯下降(P＜0.05)。
　　2.酶聯(lián)免疫吸附染色法結(jié)果顯示，與N組比較，SAP組IL-1β、TNF-α表達(dá)顯著增加，且隨著

6、時(shí)間的延長，各細(xì)胞因子的表達(dá)逐漸增加，12h達(dá)到最大峰值;與SAP組比較，Ⅰ組和A組IL-1β、TNF-α表達(dá)顯著降低(P＜0.05，P＜0.01);
　　3.免疫熒光定量PCR結(jié)果顯示，與N組比較，SAP組NF-κB mRNA、IL-1β mRNA、TNF-α mRNA表達(dá)顯著增加;與SAP組比較Ⅰ組和A組NF-κB mRNA、IL-1β mRNA、TNF-α mRNA表達(dá)顯著降低(P＜0.01)，但Ⅰ組和A組之間無明顯差異(P

7、＞0.05)。
　　結(jié)論:(1)安胰顆粒對SAP大鼠胰腺組織NF-κBp65活化表達(dá)具有抑制作用;(2)安胰顆粒能減少促炎細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β的大量釋放;(3)安胰顆粒能顯著改善SAP大鼠胰腺組織的病理損傷，降低大鼠死亡率，對SAP具有確切的防治作用;(4)安胰顆粒可能通過抑制NF-κB活化，進(jìn)而抑制細(xì)胞因子的基因轉(zhuǎn)錄，減少促炎細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β的產(chǎn)生和釋放，減輕SIRS，預(yù)防MODS的發(fā)生，從而發(fā)揮對SAP