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1、本文研究了斑點(diǎn)叉尾鮰魚(yú)皮酸溶性和酶溶性膠原蛋白的理化特性,并將提取得到的膠原蛋白進(jìn)行加工得到膠原蛋白生物復(fù)合材料,對(duì)合成的復(fù)合材料的細(xì)胞相容性進(jìn)行初步研究。主要研究結(jié)果如下:
1.膠原蛋白提取和理化特性研究
(1)用乙酸和乙酸-胃蛋白酶方法,分別提取魚(yú)皮中的酸溶性膠原蛋白和酶溶性膠原蛋白,分別對(duì)膠原蛋白中羥脯氨酸含量進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果表明提取得到的酸溶性純度高達(dá)93.11%,酶溶性純度高達(dá)93.46%。使用乙酸和
2、乙酸-胃蛋白酶提取的方法可以得到純度較高的膠原蛋白。
(2)對(duì)提取得到的膠原蛋白分別進(jìn)行紫外光譜分析、傅里葉紅外光譜分析和SDS-PAGE電泳測(cè)定。結(jié)果表明,酸溶性和酶溶性膠原蛋白具備Ⅰ型膠原蛋白的特征,屬于Ⅰ型膠原蛋白,具有完整的三螺旋結(jié)構(gòu)。
(3)對(duì)膠原蛋白進(jìn)行變性溫度測(cè)定和氨基酸分析,結(jié)果表明斑點(diǎn)叉尾鮰膠原蛋白中含有大量的甘氨酸,但其變性溫度和羥脯氨酸含量均低于哺乳動(dòng)物膠原蛋白。同時(shí),酸溶性膠原蛋白和酶
3、溶性膠原蛋白的變性溫度和氨基酸含量也有一定的區(qū)別。
2.膠原蛋白生物復(fù)合材料制備與理化特性研究
(1)采用原位合成的方法,得到膠原蛋白生物復(fù)合材料,并用0.25%戊二醛對(duì)得到的復(fù)合材料進(jìn)行交聯(lián)。
(2)對(duì)復(fù)合材料進(jìn)行XRD分析,發(fā)現(xiàn)用原位合成的方法得到的復(fù)合材料中的羥基磷灰石屬于弱結(jié)晶,結(jié)晶度較低。低結(jié)晶度的復(fù)合材料將在一定程度上有利于其自身在生物體內(nèi)的的生物降解性能,同時(shí)有利于細(xì)胞在復(fù)合材料上
4、的粘附和增殖。
(3)對(duì)復(fù)合材料進(jìn)行電鏡掃描、孔隙率測(cè)定,結(jié)果表明,復(fù)合材料孔隙率均在90%以上,具有多孔性且外觀形狀規(guī)則,孔徑大小適宜,同時(shí)有足夠的內(nèi)部表面積供細(xì)胞貼附。當(dāng)膠原蛋白和羥基磷灰石比例為50∶50時(shí),孔徑一般在40~100μm,孔隙之間有較好的連通性,可以很好的排出代謝廢物,且有利于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的交換。當(dāng)膠原蛋白和羥基磷灰石比例為30∶70時(shí),孔徑一般在20μm左右,而孔壁明顯變厚。
3.不同配比的
5、膠原蛋白生物復(fù)合材料細(xì)胞相容性研究
(1)使用膠原蛋白復(fù)合材料的浸提液對(duì)MC3T3進(jìn)行培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),各實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞逐漸出現(xiàn)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),細(xì)胞進(jìn)行大量的有絲分裂,培養(yǎng)到第7天,細(xì)胞增長(zhǎng)越來(lái)越密集,呈現(xiàn)瓦狀排列,基本融合成單層細(xì)胞。而在30∶70ASC復(fù)合材料的一組中,細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不好,表明該組復(fù)合材料具有一定的細(xì)胞毒性。
(2)采用MTT法,對(duì)各組復(fù)合材料浸提液中的細(xì)胞增殖率進(jìn)行測(cè)定。隨著培養(yǎng)時(shí)間延
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