斑點(diǎn)叉尾鮰病毒的增殖純化及其結(jié)構(gòu)蛋白的鑒定.pdf

1、斑點(diǎn)叉尾鮰病毒?。╟hannel catfish virus disease，CCVD）是危害斑點(diǎn)叉尾鮰養(yǎng)殖的主要疾病之一，給斑點(diǎn)叉尾鮰養(yǎng)殖業(yè)造成了重大損失。該病的病原斑點(diǎn)叉尾鮰病毒（channel catfish virus，CCV），是一種雙鏈DNA病毒，由囊膜、間層和核衣殼組成，其基因組大小約為134 kbp，屬于魚(yú)類皰疹病毒科成員。
　　本實(shí)驗(yàn)以斑點(diǎn)叉尾鮰病毒(CCV)為研究對(duì)象，取得了以下的實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　1.將斑

2、點(diǎn)叉尾鮰病毒(CCV)感染斑點(diǎn)叉尾鮰卵巢細(xì)胞(channel catfish ovary，CCO)來(lái)增殖病毒，利用蔗糖密度梯度離心法對(duì)病毒粒子進(jìn)行純化，在40％和50％蔗糖梯度之間可見(jiàn)一條清晰、乳白色的病毒條帶，負(fù)染后經(jīng)透射電鏡觀察， CCV病毒粒子呈圓形，直徑約為175-200nm，有囊膜，具有典型的皰疹病毒特征。
　　2.取適量純化的CCV組分進(jìn)行SDS-PAGE電泳分析，考馬斯亮藍(lán)染色后，可見(jiàn)約17條蛋白條帶。將這些蛋白條帶

3、切下，胰酶消化后利用電噴霧四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜(ESI-Q-TOF MS/MS)進(jìn)行質(zhì)譜分析，共鑒定了13種結(jié)構(gòu)蛋白，其中包括兩種膜蛋白:一種囊膜蛋白ORF59，為CCV的主要囊膜蛋白，另一種為糖蛋白ORF46;五種間層蛋白分別是:ORF74、ORF73、ORF72、ORF65和ORF15;三種核衣殼蛋白:ORF39、ORF53和ORF27，其中ORF39為CCV的主要核衣殼蛋白;兩種已報(bào)道但未描述功能的蛋白，分別是ORF66和ORF79