應(yīng)用PCR和DNA微列陣對肌營養(yǎng)不良的綜合診斷分析.pdf

1、肌營養(yǎng)不良是一類肌細(xì)胞本身病變導(dǎo)致的單基因遺傳性肌肉疾病，其臨床癥狀和發(fā)病原因具有高度異質(zhì)性，特點(diǎn)是進(jìn)行性肌無力和萎縮，可以通過常染色體隱性、常染色體顯性或X連鎖隱性的方式遺傳。根據(jù)疾病表現(xiàn)癥狀和發(fā)病時(shí)間，肌營養(yǎng)不良被分為八大類型：假肥大型肌營養(yǎng)不良、肢帶型肌營養(yǎng)不良、面肩胛肱型肌營養(yǎng)不良、遠(yuǎn)端型肌營養(yǎng)不良、強(qiáng)直性肌營養(yǎng)不良、先天型肌營養(yǎng)不良、埃默里氏肌營養(yǎng)不良、眼咽型肌營養(yǎng)不良，其中假肥大型肌營養(yǎng)不良最為常見。目前，肌營養(yǎng)不良的臨床診

2、斷主要是根據(jù)疾病癥狀、家族史，并輔以血常規(guī)檢測、電生理檢測、骨骼肌核磁共振及肌活檢檢測。
　　肌營養(yǎng)不良的臨床表現(xiàn)復(fù)雜多變。同一類型肌營養(yǎng)不良的臨床癥狀可能存在較大差異，如LGMD2I型輕度癥狀，患者發(fā)病時(shí)間為6~23歲，類似于貝克氏肌營養(yǎng)不良；LGMD2I重度癥狀，患者10歲之前發(fā)病，之后失去行走能力。不同類型肌營養(yǎng)不良的臨床癥狀之間也可能存在病征交叉，如DYSF基因突變可造成肢帶型肌營養(yǎng)不良和三好氏遠(yuǎn)端肌營養(yǎng)不良，疾病均表現(xiàn)為

3、多于青春期前后發(fā)病，進(jìn)程緩慢，近遠(yuǎn)端骨骼肌明顯受累，用傳統(tǒng)方法進(jìn)行臨床分型診斷有較大難度。這些都增加了肌營養(yǎng)不良的臨床診斷難度，是肌營養(yǎng)不良診治研究的瓶頸。
　　隨著肌營養(yǎng)不良相關(guān)基因的定位及功能研究，肌營養(yǎng)不良發(fā)病分子機(jī)理被逐漸闡釋。對肌營養(yǎng)不良相關(guān)基因的檢測分析能有助于肌營養(yǎng)不良的精確臨床診治、遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷。
　　本課題我們采用多重PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、DNA微列陣的基因檢測分析方法，對五大類型肌營養(yǎng)不良的3

4、4個(gè)相關(guān)基因進(jìn)行了較全面的檢測分析。首先通過多重PCR法對假肥大型肌營養(yǎng)不良相關(guān)基因DMD的26個(gè)熱缺失突變外顯子進(jìn)行缺失性檢測。再使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法對假肥大型患者的女性親屬進(jìn)行相應(yīng)外顯子的相對定量分析，判斷女性受檢者的基因突變攜帶狀況。最后，使用DNA微列陣的方法對34個(gè)肌營養(yǎng)不良相關(guān)基因的507個(gè)突變位點(diǎn)進(jìn)行檢測分析，覆蓋了假肥大型、肢帶型、遠(yuǎn)端型、先天型、EDMD型這五大類型42種亞型的肌營養(yǎng)不良。通過這一基因檢測體系，我們