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文檔簡介
1、目的:研究TRIM29基因在高轉(zhuǎn)移鼻咽癌細(xì)胞系5-8F和低轉(zhuǎn)移鼻咽癌細(xì)胞系6-10B中的表達(dá)水平及其對鼻咽癌細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期分布、細(xì)胞遷移能力和細(xì)胞侵襲能力的影響,了解其與鼻咽癌的關(guān)系,揭示其在鼻咽癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移中的作用。
方法:(1)采用qRT-PCR(Quantitative Reverse TranscriptionPolymerase Chain Reaction)和蛋白印跡法(Western Blotting)分別
2、檢測5-8F細(xì)胞和6-10B細(xì)胞中TRIM29基因的mRNA和蛋白表達(dá)水平;(2)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將TRIM29特異性siRNA載體和空白載體分別轉(zhuǎn)染5-8F細(xì)胞,將TRIM29表達(dá)載體和空白載體分別轉(zhuǎn)染6-10B細(xì)胞,建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系;(3)采用Western Blotting檢測細(xì)胞中TRIM29蛋白表達(dá)水平的變化;MTT法檢測細(xì)胞增殖能力的變化;流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期分布的變化;劃痕實驗觀察細(xì)胞遷移能力的變化;Transwell實驗
3、檢測細(xì)胞侵襲能力的變化。采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
結(jié)果:(1)5-8F細(xì)胞中TRIM29的表達(dá)水平明顯高于6-10B細(xì)胞;(2)建立了TRIM29低表達(dá)的5-8F細(xì)胞系、TRIM29高表達(dá)的6-10B細(xì)胞系及其空白載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系;(3)與空白載體轉(zhuǎn)染的5-8F細(xì)胞和未轉(zhuǎn)染5-8F細(xì)胞比較,特異性siRNA轉(zhuǎn)染的TRIM29低表達(dá)5-8F細(xì)胞的增殖能力降低,G0/G1期細(xì)胞增加,而S期細(xì)胞減少,細(xì)胞遷移能力
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