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文檔簡介
1、背景:
肺癌是全球發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤,其死亡人數(shù)占世界癌癥死亡的1/4,而非小細胞肺癌約占肺癌總數(shù)的85%,其中由于腫瘤轉移導致的死亡率高達90%,對
肺癌進展的分子機制研究有助于為肺癌治療提供新的靶點。以往研究表明肺癌組織中 TRIM29呈現(xiàn)高表達,但與其有關的作用機制研究仍較少。2014年,Ai等在乳腺癌的研究中發(fā)現(xiàn) TRIM29與 Twist1之間存在互相調節(jié)的作用,從而影響腫瘤細胞的遷移能力。為研究
2、 TRIM29對人非小細胞肺癌遷移能力的影響,本研究選取具有人非小細胞肺癌特性的A549細胞株作為研究對象,探討 TRIM29沉默對肺癌細胞遷移能力及相關蛋白Twist1、E-cadherin表達的影響。
目的:
探討TRIM29對人非小細胞肺癌A549細胞株遷移能力的影響,并探討TRIM29促進非小細胞肺癌轉移的機制。
方法:
1、采用RNAi技術和病毒介導法構建穩(wěn)定表達TRIM29shRNA的
3、A549細胞株;
2、Real-time PCR及Western-blotting檢測siRNA干擾后TRIM29基因及蛋白表達情況;3、Transwell小室法檢測siRNA干擾后肺腺癌A549細胞株遷移能力的改變;
4、Western-blotting檢測 siRNA干擾后肺腺癌 A549細胞中 Twist1蛋白、E-cadherin蛋白表達的變化情況。
結果:
1、將 TRIM29shRNA
4、及陰性對照 TRIM29shRNA導入肺腺癌 A549細胞中,Real-time PCR及 Western-blotting檢測 siRNA干擾后 TRIM29基因及蛋白表達水平的變化。結果顯示:與空白組和對照組相比,siRNA處理組A549細胞中TRIM29的mRNA表達量無明顯改變,但其蛋白表達量卻明顯下降。
2、Transwell小室法檢測siRNA干擾后肺腺癌A549細胞的遷移能力,結果顯示:與空白組和對照組相比,TR
5、IM29shRNA處理組A549細胞遷移能力明顯減弱。
3、Western-blotting檢測不同處理組細胞中Twist1蛋白、E-cadherin蛋白表達的變化情況,以進一步探討 TRIM29在促進肺腺癌 A549細胞遷移的可能機制。結果顯示:隨著TRIM29蛋白表達下調,Twist1表達量下降、E-cadherin表達量升高。
結論:
本實驗通過研究TRIM29對肺腺癌A549細胞株遷移能力的影響,并
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