抗鼻咽癌中草藥的篩選和鹽酸千金藤堿對鼻咽癌細胞生長的影響及其機制的初步探討.pdf

1、目的：通過兩種途徑對中草藥的抗鼻咽癌作用進行初步篩選：一、采用血清藥理學(xué)方法制備中草藥的含藥血清，在體外用MTT法對含藥血清的抗鼻咽癌作用進行篩選；二、在體外用MTT法直接對中草藥的提取物進行抗鼻咽癌作用的篩選。篩選實驗顯示半枝蓮、腫節(jié)風等的含藥血清和茶多酚、薏苡仁的提取物在體外可以有效抑制鼻咽癌細胞的生長。簽于資料顯示青蒿、千金藤在抗腫瘤方面的作用，分別通過同樣的兩種途徑對青蒿含藥血清和千金藤的提取物(鹽酸千金藤堿)在體外用MTT法進

2、行了抗鼻咽癌作用的初步篩選，并對鹽酸干金藤堿對鼻咽癌癌細胞生長的抑制作用及其作用機制進行了探討。 方法：(1)采用MTT法檢測鹽酸千金藤堿和含青蒿血清在體外鼻對咽癌細胞CNE-1、CNE-2、5-8F、SUNE-1的生長抑制作用，篩選抗鼻咽癌中草藥；(2)鹽酸千金藤堿處理的人鼻咽癌CNE-1、CNE-2、5-8F、SUNE-1細胞株后，采用ATP法對其進行細胞活力測定、流式細胞術(shù)分析其細胞周期及透射電鏡觀察其細胞形態(tài)；(3)采用

3、基因芯片技術(shù)檢測鹽酸千金藤堿處理前后CNE-2細胞的基因表達譜改變；用實時熒光定量PCR對部分基因芯片結(jié)果進行驗證；(4)實驗數(shù)據(jù)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析處理。 結(jié)果：(1) MTT法發(fā)現(xiàn)青蒿對CNE-1、5-8F、SUNE-1、CNE-2細胞的抑制作用不明顯；鹽酸千金藤堿對四株鼻咽癌細胞的抑制作用較明顯，并且在CNE-1、5-8F、SUNE-1且呈劑量.效應(yīng)關(guān)系和時間.效應(yīng)關(guān)系，在CNE-2成劑量-效應(yīng)關(guān)系；(2)

4、ATP法發(fā)現(xiàn)鹽酸千金藤堿對四株鼻咽癌細胞生長有抑制作用，其效應(yīng)關(guān)系同MTT結(jié)果；流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)鹽酸千金藤堿處理四株鼻咽癌細胞后細胞周期停滯于G0/G1期，并可見凋亡峰；透射電鏡可見四株鼻咽癌細胞出現(xiàn)細胞凋亡形態(tài)學(xué)改變；(3)基因芯片檢測得到138個上調(diào)基因和63個下調(diào)基因。依據(jù)其生物學(xué)功能可以分為細胞增殖相關(guān)基因、細胞周期相關(guān)基因、細胞凋亡相關(guān)的基因、DNA修復(fù)基因等。采用實時熒光定量PCR對部分基因進行驗證，結(jié)果與基因芯片結(jié)果相符

5、。 結(jié)論：(1)鹽酸千金藤堿(千金藤的提取物)在體外可以有效的抑制鼻咽癌細胞的生長；青蒿在體外對鼻咽癌細胞的生長沒有明顯的影響；(2)鹽酸千金藤堿在體外將CNE-1、CNE-2、5-8F、SUNE-1細胞阻滯于G0/G1期，使細胞增殖受到抑制；(3)鹽酸千金藤堿在體外可誘導(dǎo)CNE-1、CNE-2、5-8F、SUNE-1凋亡，可有效抑制其生長；(4)鹽酸千金藤堿可以誘導(dǎo)CNE-2細胞201(138個上調(diào)，63個下調(diào))基因的差異表達