惡性腦膠質(zhì)瘤亞臨床腫瘤分割照射方案優(yōu)化及機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分:惡性腦膠質(zhì)瘤亞臨床腫瘤分割照射方案優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的:比較不同分割照射方案照射后惡性腦膠質(zhì)瘤亞臨床腫瘤的成瘤率差別及腫瘤生長情況,篩選合理適用的惡性腦膠質(zhì)瘤亞臨床腫瘤分割照射的優(yōu)化方案,為臨床更好地開展腦膠質(zhì)瘤術(shù)后放療提供實(shí)測實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 材料與方法:采用人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤裸小鼠亞臨床腫瘤為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ瓦M(jìn)行不同分割方案照射(常規(guī)分割照射方案2Gy/d×5/w；非常規(guī)分割照射方案:1.6Gyx2/dx5/w

2、、4Gyx3/w、3Gy/d×5/w,總劑量分別為40Gy和60Gy)及靶向藥泰欣生(0.5mg/只/周,共7周)聯(lián)合放射線照射(常規(guī)分割,總劑量60Gy)。觀察指標(biāo):1)照射療程結(jié)束時(shí)腫瘤形成率,2)腫瘤平均復(fù)發(fā)時(shí)間,3)最終成瘤率(18-24周實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí))。
　　 結(jié)果:(1)在接種細(xì)胞數(shù)為2.2×105,空白對照組成瘤率為87.5％(7/8)的情況下,總劑量40Gy時(shí),照射結(jié)束時(shí)常規(guī)分割組(第5周)、1.6Gyx2/dx5

3、/w組(第4周)及4Gyx3/w組(第4周)的成瘤率分別為75％、25％和0,腫瘤復(fù)發(fā)時(shí)間分別為96天、109天和102天,至觀察結(jié)束時(shí)(第18周)三組的腫瘤成瘤率分別為100％、100％和100％,無論何種分割方案40Gy的照射總劑量均未能有效控制亞臨床腫瘤的不斷生長；(2)在接種細(xì)胞數(shù)為3.1×105空白對照組成瘤率為100％情況下,總劑量60Gy照射結(jié)束時(shí)常規(guī)分割組(第7周)、1.6Gyx2/dx5/w組(第5周)、4Gyx3/w

4、組(第6周)及3Gyx5/w組(第5周)的成瘤率分別為100％、0、0和0,腫瘤復(fù)發(fā)時(shí)間分別為103天、131天、110天和124天,至觀察結(jié)束時(shí)(第24周)各組成瘤率分別為100％、75％、100％和100％；(3)泰欣生單純給藥組(0.5mg/只/周和1mg/只/周)、單純照射組(常規(guī)分割照射,總劑量60Gy)及放化聯(lián)合組照射結(jié)束時(shí)各組的成瘤率分別為100％、100％、100％和75％,腫瘤平均復(fù)發(fā)時(shí)間分別為:31天、46天、103

5、天和97天。至觀察結(jié)束時(shí)(第24周)各組成瘤率均為100％。
　　 結(jié)論:(1)對近期療效而言,在空白對照組成瘤率為87.5％的條件下,40Gy的照射總劑量即可取得一定亞臨床腫瘤的近期控制率,其中大分割組(4Gy×3/w)最好,但遠(yuǎn)期療效均不理想。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,至觀察結(jié)束時(shí)(第18周)各實(shí)驗(yàn)組的成瘤率均為100％,表明40Gy的總劑量只能延緩腫瘤復(fù)發(fā)的時(shí)間,但未取得治愈的效果,因此對腫瘤生長控制而言,40Gy總劑量是不夠的。(2

6、)將總照射劑量提高到60Gy,腦膠質(zhì)瘤的遠(yuǎn)期控制有一定提高。1.6Gy×2/d×5/w組的遠(yuǎn)期控制率為25％。(3)在總照射劑量相同情況下,靶向藥泰欣生聯(lián)合常規(guī)分割放射線照射的近期療效好于單純給藥和單純常規(guī)分割放射治療[療程結(jié)束時(shí)(第7周)成瘤率分別為75％、100％和100％],差于非常規(guī)單純放療組(各非常規(guī)分割照射組60Gy療程結(jié)束時(shí)的成瘤率均為0)。表明泰欣生聯(lián)合常規(guī)分割放射治療腦膠質(zhì)瘤效果不佳,可能與EGFR表達(dá)陰性有關(guān)。

7、>　　 第二部分:干細(xì)胞標(biāo)記技術(shù)測定體外培養(yǎng)腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(BT325)細(xì)胞系干細(xì)胞數(shù)的初步研究
　　 目的:通過與經(jīng)典干細(xì)胞識別方法——細(xì)胞克隆形成分析法結(jié)果的比較,探討用現(xiàn)代分子生物學(xué)干細(xì)胞標(biāo)記技術(shù)測定腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞群中干細(xì)胞數(shù)量的可行性。
　　 材料和方法:實(shí)驗(yàn)采用指數(shù)生長期的人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤BT325細(xì)胞系(北京神經(jīng)外科研究所建立),用經(jīng)典單細(xì)胞克隆形成分析法測定細(xì)胞克隆形成率；用現(xiàn)代分子生物學(xué)干細(xì)胞標(biāo)記技術(shù)(流

8、式細(xì)胞術(shù)和免疫組化法)測定BT325細(xì)胞中干細(xì)胞標(biāo)記物(CD133)陽性細(xì)胞標(biāo)記率及裸小鼠移植瘤組織中干細(xì)胞標(biāo)記物(CD133、Nestin)的表達(dá)并對經(jīng)典和現(xiàn)代干細(xì)胞鑒別技術(shù)的測定結(jié)果進(jìn)行分析和比較。
　　 結(jié)果:實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:(1)當(dāng)反應(yīng)體系中CD133抗體含量分別為0.45μg/100μl、0.9μg/100μl、1.8μg/200μl時(shí)人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 BT325細(xì)胞系CD133陽性細(xì)胞比例分別為0.62％、2.55％、

9、0.067％,PBS組為0.1％、0.1％、和0％,PE組為0.9596、0.3％和0.1％,各組間差異無顯著性(P=0.311和P=0.473)；(2)免疫組化的分析結(jié)果顯示BT325裸小鼠移植瘤組織中未見CD133表達(dá),少許細(xì)胞nestin表達(dá)陽性；(3)與干細(xì)胞分子標(biāo)志物測定同步進(jìn)行的單細(xì)胞克隆形成分析法的測定結(jié)果顯示體外培養(yǎng)的人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(BT325)的克隆形成率為39.25％±11.35。
　　 結(jié)論:同步進(jìn)行