Cx43 RNA干擾防治遲發(fā)性缺血性神經(jīng)功能障礙(DIND)的體內(nèi)實驗研究.pdf

1、目的:
　　自發(fā)性蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH)占腦血管意外的5％左右,在腦血管意外中僅低于腦內(nèi)出血和腦梗死的發(fā)病率,但 SAH的病死率明顯高于后兩者[1],并且目前缺乏特效治療措施。SAH后出現(xiàn)的遲發(fā)性缺血性神經(jīng)功能障礙(DIND)是導(dǎo)致高致死高致殘率的主要原因。DIND一直是神經(jīng)外科學(xué)者研究的重點和熱點。DIND的致病因素,公認(rèn)的主要的兩個理論:即大血管的延遲性痙攣,及微血管的功能紊亂。我們實驗室前期研究表明:縫隙連接(GJ)可能在

2、自發(fā)性蛛網(wǎng)膜下腔出血后的DIND病理過程中起到十分重要的作用。應(yīng)用特異性的Cx43 siRNA可有效地沉默縫隙連接蛋白43(Cx43)的表達水平,同時能減輕腦血管痙攣的程度[40]。在前期研究的基礎(chǔ)上,本實驗擬驗證:有效下調(diào)縫隙連接Cx43后對SAH后發(fā)生的DIND的影響。
　　方法:
　　1、二次注血模型的建立:采用普通級SD大鼠,腹腔麻醉后抽取尾靜脈血約0.3ml備用,體式顯微鏡下枕大池穿刺,見清亮腦脊液流出約0.1ml

3、,將尾靜脈血注入,次日進行同前步驟,完成整個造模過程。
　　2、SAH模型的鑒定:分為單純SAH造模組和正常組(假手術(shù)組),第七天應(yīng)用墨汁染色法測量基底動脈直徑及神經(jīng)功能評分評價神經(jīng)功能缺損,鑒定SAH模型。
　　3、病毒的沉默效率檢測:采用腺病毒枕大池注射設(shè)立病毒處理組,單純SAH組和正常組對照。分1d,3d,7d,14d四個時間點處死SD大鼠,取基底動脈, Western bloting檢測病毒沉默Cx43的效率。

4、>　　4、神經(jīng)功能評分:單純SAH造模組和正常組,預(yù)處理組,處理組等分7d,14d兩個時間行神經(jīng)功能評分(改良的garcia JH和beam balance評分法)。
　　5、MRI檢測:正常組和單純 SAH造模組,預(yù)處理組,處理組分7d,14d兩個時間點行 MRI(DWI,PWI)檢測,包括腦血流量(CBF),表觀彌散系數(shù)(ADC)值的檢測。
　　結(jié)果:
　　1、印度墨汁染色法檢測基底動脈直徑,造模后7天,單純 SA

5、H造模組的基底動脈直徑明顯小于假手術(shù)對照組。
　　2、腺病毒沉默效率檢測:腺病毒腦池注射可以有效的沉默腦血管的 Cx43表達。
　　3、神經(jīng)功能評分:改良的garcia評分法:SAH組與正常組比,7d,出現(xiàn)神經(jīng)功能缺損癥狀,14天神經(jīng)功能缺損癥狀與正常組比無明顯差異;所有的實驗處理組與單純SAH組比較,均不存在明顯的神經(jīng)功能缺損;Beam balance評分法,7d,14d所有組別之間不存在明顯差異。
　　4、MRI結(jié)

6、果:SAH組與正常組比較,7d出現(xiàn)CBF及ADC值的下降;病毒預(yù)處理組和病毒處理組與單純的SAH造模組比,7d可以改善CBF,14天未能改善CBF,7d,14d均未能改善ADC值;甘珀酸預(yù)處理、甘珀酸處理組、病毒溶媒預(yù)處理組、病毒溶媒處理組、甘珀酸溶媒預(yù)處理組及甘珀酸溶媒處理組與單純SAH組比較,在7d和14d兩個時間點未能改善CBF,ADC值。
　　結(jié)論:
　　1、自體尾靜脈血二次枕大池注血模型能夠再現(xiàn)SAH的病程。