雷沙吉蘭對(duì)BAG2與BAG5蛋白的作用與多巴胺能神經(jīng)元保護(hù)作用.pdf

1、帕金森病(Parkinson's disease，PD)是最常見的神經(jīng)退行性疾病之一，其發(fā)病率僅次于阿爾茨海默癥。典型的臨床表現(xiàn)為靜止性震顫、肌肉強(qiáng)直、運(yùn)動(dòng)遲緩、姿勢(shì)步態(tài)異常等。以黑質(zhì)致密區(qū)多巴胺能神經(jīng)元丟失及多巴胺能神經(jīng)遞質(zhì)缺乏為主要病理表現(xiàn)。此外在存活的神經(jīng)元中發(fā)現(xiàn)嗜酸性蛋白的沉積，形成Lewy小體也是其突出病理改變之一。大多數(shù)PD患者為散發(fā)病例，僅10％左右的PD患者有家族聚集現(xiàn)象。對(duì)PD的發(fā)病機(jī)制研究較多，但至今仍不完全明確，多

2、認(rèn)為環(huán)境及遺傳易感性相互作用導(dǎo)致了PD的發(fā)病。在PD動(dòng)物模型及PD病人尸檢中發(fā)現(xiàn)了氧化應(yīng)激、線粒體功能障礙、泛素蛋白降解系統(tǒng)異常、內(nèi)環(huán)境鈣失衡及炎癥的相關(guān)證據(jù)，提示這些變化參與了PD的發(fā)病。形態(tài)學(xué)研究顯示PD患者的神經(jīng)元丟失主要有以下幾種形式:凋亡、壞死、自噬。超微結(jié)構(gòu)觀察PD患者的黑質(zhì)區(qū)神經(jīng)元內(nèi)發(fā)現(xiàn)有凋亡及自噬發(fā)生的證據(jù)。
　　 BAG(Bcl-2 associated athanogene)蛋白家族是在研究Bcl-2促進(jìn)細(xì)胞

3、存活過程中的協(xié)同作用蛋白時(shí)發(fā)現(xiàn)，故而得名。該家族蛋白是一類進(jìn)化相對(duì)保守的家族蛋白，其各成員蛋白分子的C-末端至少含有一個(gè)保守的BAG結(jié)構(gòu)域。該家族成員蛋白的功能多樣化，能參與執(zhí)行多種生理功能，包括凋亡、腫瘤發(fā)生、神經(jīng)分化、應(yīng)激及細(xì)胞周期。在多種惡性腫瘤疾病中發(fā)現(xiàn)BAG家族蛋白的表達(dá)有上調(diào)，促進(jìn)細(xì)胞存活。研究認(rèn)為BAG家族蛋白能通過與Hsc70/Hsp70或bcl-2相互作用起到抗凋亡作用。另外，有研究顯示BAG2蛋白參與調(diào)節(jié)tau蛋白的

4、非泛素依賴蛋白酶體降解。Kalia等研究發(fā)現(xiàn)BAG5蛋白通過Hsp70與CHIP相互作用能調(diào)節(jié)a-突觸核蛋白(a-synuclein)的寡聚化。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)BAG5蛋白通過調(diào)節(jié)PINK1能起到穩(wěn)定線粒體作用提示BAG家族蛋白與神經(jīng)退行性疾病有重要的聯(lián)系。
　　 雷沙吉蘭是一種新型治療PD藥物，是一種高效能、不可逆性單胺氧化酶-B選擇性抑制劑。可用于早起單獨(dú)治療PD或用于晚期患者輔助左旋多巴治療。與其他抗帕金森病藥物有所不

5、同的是，雷沙吉蘭在提高多巴胺神經(jīng)遞質(zhì)的同時(shí)，具有保護(hù)多巴胺能神經(jīng)元做用。大量研究認(rèn)為其神經(jīng)元保護(hù)作用可能通過以下機(jī)制:1）穩(wěn)定線粒體膜電位;2）誘導(dǎo)抗凋亡基因表達(dá)如Bcl-2及下調(diào)促凋亡基因表達(dá)如Bax、Bad;3)誘導(dǎo)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子BDNF及GDNF表達(dá);4）調(diào)節(jié)淀粉樣前蛋白的酶解加工過程;5）通過激活NF-κB系統(tǒng)抗凋亡。以及其他尚未明確的作用位點(diǎn)及作用機(jī)制。
　　 目的:
　　 探討B(tài)AG家族蛋白是否參與到雷沙吉蘭對(duì)

6、多巴胺能神經(jīng)元的保護(hù)作用的機(jī)制中。
　　 方法:
　　 1、運(yùn)用western-blot、免疫熒光技術(shù)檢測(cè)MPTP損傷誘導(dǎo)的PD小鼠模型中BAG1、BAG2、BAG3及BAG5蛋白的變化。
　　 2、雷沙吉蘭干預(yù)MPTP損傷誘導(dǎo)帕金森動(dòng)物模型后，運(yùn)用western-blot、免疫熒光技術(shù)檢測(cè)雷沙吉蘭干預(yù)后小鼠黑質(zhì)區(qū)多巴胺能神經(jīng)元內(nèi)BAG2及BAG5蛋白的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1、在MPTP損

7、傷誘導(dǎo)的PD小鼠模型中，運(yùn)用尼氏染色發(fā)現(xiàn)PD模型組小鼠黑質(zhì)區(qū)神經(jīng)元較對(duì)照組減少;western-blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)PD組小鼠黑質(zhì)區(qū)多巴胺能神經(jīng)元中BAG2及BAG5蛋白膠對(duì)照組表達(dá)增加，BAG1、BAG3蛋白無明顯變化;免疫熒光檢測(cè)發(fā)現(xiàn)PD組小鼠黑質(zhì)區(qū)多巴胺能神經(jīng)元BAG2及BAG5染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組增多。
　　 2、雷沙吉蘭干預(yù)MPTP損傷誘導(dǎo)PD小鼠模型后運(yùn)用western-blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)給予雷沙吉蘭干預(yù)組較對(duì)照組小鼠黑