甘露糖結(jié)合凝集素與Dectin-1、TLR2在真菌性角膜炎中的相互作用.pdf

1、目的：探討甘露糖結(jié)合凝集素（mannose binding lectin，MBL）在煙曲霉菌感染的人角膜上皮細胞中的作用，及其與Dectin-1、TLR2的相互作用。
　　方法：以體外培養(yǎng)的正常人永生化角膜上皮細胞為對照組，實驗組為煙曲霉菌菌絲抗原、重組人MBL（recombination human MBL，rhMBL）、MBL抗體、昆布多糖及TLR2抗體刺激的人永生化角膜上皮細胞，在4,8,12h時間點用Western blo

2、t法檢測MBL蛋白表達，在0.5，1，2，4h用real-time PCR法檢測MBL mRNA,在8h時間點real-time PCR法檢測Dectin-1、TLR2、IL-1β及TNF-αmRNA,在24h時間點用Western blot法檢測Dectin-1、TLR2蛋白表達，在24h時間點用Elisa法檢測IL-1β、TNF-α蛋白表達變化。
　　結(jié)果：煙曲霉菌菌絲抗原刺激后可引起MBL基因及蛋白水平表達量相對增高，基因水

3、平表達呈時間依賴性，1h時達到峰值。rhMBL可促進下游細胞因子 IL-1β、TNF-α的基因及蛋白水平表達，并呈劑量依賴性，10ug/ml rhMBL增強作用最強，抑制MBL可減少IL-1β、TNF-α的基因及蛋白水平表達。rhMBL能增強煙曲霉菌菌絲刺激引起的 Dectin-1、TLR2的產(chǎn)生，呈劑量依賴，10ug/ml為最佳刺激濃度，抑制MBL能明顯下調(diào)Dectin-1、TLR2表達。分別以昆布多糖及TLR2抗體抑制Dectin-

4、1、TLR2，MBL表達均較單純真菌刺激組降低。其表達變化差異均有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論：MBL存在于正常角膜上皮細胞中，煙曲霉菌菌絲刺激引起其表達升高。MBL參與了人角膜上皮細胞對煙曲霉菌菌絲抗原的識別，介導下游炎癥因子釋放，在人角膜上皮細胞固有免疫早期階段發(fā)揮作用。MBL可增強真菌性角膜炎中模式識別受體 Dectin-1、TLR2的表達，間接促進機體抗感染作用； MBL與Dectin-1、TLR2在人角膜上皮細胞抗真菌感染中發(fā)