冠心病患者循環(huán)miR-21、miR-100、miR-423-5p的表達及其與左室重塑的關系研究.pdf

1、研究背景：
　　冠心病（CAD）嚴重威脅著人類健康，發(fā)病呈上升趨勢。冠心病是導致心衰的的主要原因[1]，而心衰是各種心臟疾病的嚴重和終末階段，早期正確診斷、鑒別診斷和治療冠心病能有效減少死亡率，基于此，尋求診斷冠心病靈敏度和特異性高的標志物仍然任重道遠。CAD導致心衰的主要發(fā)病機制之一為心肌病理性重塑，如心肌壞死、凋亡、肥大、自噬、心肌細胞外基質沉積、血管新生等，心臟功能漸漸惡化，發(fā)展至心衰直至患者死亡。CAD患者減少心肌纖維化、

2、調控缺血區(qū)周邊的基質沉積、增加血管新生對于防止心室重塑、改善心功能尤其重要。心臟缺血后心臟相關細胞內基因表達紊亂、調節(jié)失衡，導致相應受調節(jié)蛋白表達發(fā)生改變，可能是冠心病缺血后心臟發(fā)生心室重塑的病理基礎。基于以上理論，從基因或分子水平研究心室重塑有可能為臨床治療冠心病、防止心室重塑提供新的思路。MicroRNAs（miRNAs）是一類長度為21~25個核糖核苷酸的非編碼內源性小單鏈 RNAs分子，在生物進化過程中高度保守。它們通過堿基互補

3、或部分堿基互補與目標mRNA結合，使mRNA降解或者抑制mRNA的翻譯，在轉錄后水平調節(jié)基因表達。MiRNAs在多種生理和病理過程中發(fā)揮作用，在細胞分化、生長、增殖及凋亡中起著重要的調節(jié)作用。MiRNAs在心血管系統(tǒng)高度表達，幾乎參與調控了心臟所有的病理生理過程，在心臟的生理發(fā)育、心肌肥厚、缺血再灌注損傷、血管再生、動脈粥樣硬化、心肌細胞凋亡、心肌纖維化等過程中，miRNAs均發(fā)揮著重要作用。近年發(fā)現(xiàn)循環(huán)血中miRNAs能穩(wěn)定存在，循環(huán)

4、miRNAs隨疾病發(fā)生發(fā)展而表達水平發(fā)生改變，循環(huán)血中miRNAs測定也許能用于心血管疾病的診斷和預后評估。左室重塑作為CAD演變成慢性心衰的主要病理生理機制，miRNAs在心臟的重塑過程中扮演了重要角色，但循環(huán)miRNAs在冠心病不同組別患者的表達及其與左室重塑的關系如何，國內鮮見報道。本研究特選出在心血管系統(tǒng)高度表達，且分別在心肌纖維化、血管再生和心力衰竭中發(fā)揮作用的三個miRNAs，即miR-21、miR-100、miR-423-

5、5p，測定其血漿表達水平，探索三個miRNAs在冠心病的表達及其與左室重塑的關系。
　　目的：
　　通過測定冠心病（CAD）患者循環(huán)血漿 miR-21、miR-100、miR-423-5p的相對表達量，比較冠心病不同組間循環(huán) miRNAs表達量，探討該三個 miRNAs與CAD的關系，并評價循環(huán)miRNAs與CAD患者左室重塑的關系。
　　方法：
　　選擇2012年3月至2013年3月在廣州醫(yī)科大學附屬廣州市第一

6、人民醫(yī)院心內科住院并接受冠狀動脈造影檢查（CAG）的CAD患者268例進行研究，其中男178例，女90例，平均年齡（65.4±11.7）歲。收集患者的一般臨床資料及血生化、心臟 B超等臨床數(shù)據建立數(shù)據庫。入選的冠心病患者根據臨床癥狀、超聲心動圖、心電圖及實驗室心肌損傷標志物等分為穩(wěn)定型心絞痛組（SA組，42例）、急性冠脈綜合征組（ACS組，226例），ACS組包括不穩(wěn)定型心絞痛組（UA組，127例）和急性心肌梗死組（AMI組，99例）。

7、CAD患者行心臟B超檢查后，根據左室質量指數(shù)（LVMI）、左室射血分數(shù)（LVEF）、左室舒張末期容積（LVEDV）和左室收縮末期容積（LVESV）的參數(shù)值將CAD患者分為左室重塑組（119例）和非左室重塑組（149例）*。另選取50例同期在我院體檢中心的健康體檢者作為對照組，男30例，女20例，平均年齡（64.1±8.9）歲。利用實時熒光定量PCR技術（qRT-PCR）檢測研究對象循環(huán)血漿中miR-21、miR-100、miR-423-

8、5p的相對表達量。比較CAD組和對照組miR-21、miR-100、miR-423-5p的表達差異；并以miRNAs相對表達量為預測變量，以左室重塑為結局變量，其它與左室重塑和miRNAs表達較為密切的指標為混淆變量，建立logistic回歸探討CAD患者中miR-21、miR-100、miR-423-5p相對表達水平及其它混淆因素與左室重塑的關系。
　　*注：參考2006年美國超聲心動圖學會和ESC心腔測量的推薦意見，以及Fer

9、tin等[2,3]作者的研究，入選的268例患者根據心臟B超參數(shù)分為左室重塑組（119例）和非左室重塑組（149例），以下一項和/或多項指標符合判斷為左室重塑：
　?。?）左室質量指數(shù)（LVMI）≥124 g/m2（男），LVMI≥110 g/m2（女）（2003年歐洲高血壓指南推薦左室肥厚標準）；
　　（2）左室射血分數(shù)（LVEF）<50％；
　　（3）左室舒張末期容積（LVEDV）≥120 ml（男），LVEDV≥

10、103 ml（女）；
　?。?）左室收縮末期容積（LVESV）≥58 ml（男），LVESV≥49 ml（女）。
　　結果：
　　1、以年齡分層，循環(huán)miR-21、miR-100、miR-423-5p相對表達水平在CAD患者各個年齡段基本保持穩(wěn)定，左室重塑病例比和LVMI隨著年齡增加而升高，LVEF隨年齡升高而下降。
　　2、 CAD患者miRNAs相對表達水平和左室重塑病例比在男、女性別間一致，左室重塑病例比均

11、為44.4%；左室重塑病例比在SA組和ACS組差異無統(tǒng)計學意義，分別是42.9%（18例）和44.7%（101例）。
　　3、分別按miR-21、miR-100、miR-423-5p相對表達量的四分位數(shù)分組，隨著miR-21、miR-423-5p相對表達量的增加，左室重塑例數(shù)在各個四分位數(shù)中所占比例逐漸增加(P<0.001 or P=0.018)；左室重塑病例比例在miR-100的第一、第二、第三分位數(shù)逐漸上升（P<0.001），

12、但在第三分位和第四分位差別無統(tǒng)計學意義（P=0.866）。
　　4、以年齡分層，BMI、TC、HDL-c、高脂血癥比例、?-受體阻滯劑使用比例、ACEI/ARB使用比例、CCB使用比例、硝酸酯類使用比例在各年齡段之間差異無統(tǒng)計學意義；隨著年齡增加，患者的CAD病程、血尿酸水平、BNP、NT-proBNP、HsCRP、高尿酸血癥比例、高血壓比例、糖尿病比例逐漸升高，符合疾病發(fā)生發(fā)展的一般規(guī)律，但各年齡段之間差異無統(tǒng)計學意義；60歲以

13、下人群中，吸煙比例、TG、LDL-C明顯升高，可能和這個人群男性比例大有關；血肌酐水平、心衰比例、地高辛使用比例、利尿劑使用比例、隨年齡段升高而增加，差異有統(tǒng)計學意義，年齡在80歲以上年齡段地高辛、利尿劑用藥比例較高；阿司匹林和降脂藥使用比在各組間差異有統(tǒng)計學意義。
　　5、和對照組相比，SA組的miR-21、miR-100、miR-423-5p相對表達量差異沒有統(tǒng)計學意義（P值分別=0.565，0.700，0.843）；UA組和

14、AMI組的miR-21、miR-423-5p兩組之間差異無統(tǒng)計學意義（P值均>0.05），但明顯高于對照組和SA組（P值均<0.05）；UA組miR-100表達水平明顯高于對照組（P=0.003），但與SA組、AMI組之間的表達差異無統(tǒng)計學意義（P值分別=0.323，0.255），AMI組與對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義（P=0.638）。
　　6、簡單相關分析顯示，miR-21相對表達量與HDL-c、LVEF呈負相關關系（r分別=

15、-0.146，-0.239， p<0.05 or p<0.001），與血肌酐、血尿酸、BNP、NT-proBNP、HsCRP、LVEDD、IVST、LVEDV、LVESV、LVM、LVMI呈正相關關系（r分別=0.133、0.159、0.146、0.214、0.168、0.218、0.155、0.219、0.232、0.153，p均<0.05）；miR-100水平與上述臨床數(shù)據無明顯相關性（p>0.05）；miR-423-5p與LVEF

16、呈負相關關系（r=-0.076，p<0.001），與BNP、NT-proBNP、HsCRP、LVEDD、IVST、LVEDV、LVESV、LVM、LVMI呈正相關（r分別=0.166、0.180、0.241、0.207、0.272、0.240、0.171， p均<0.05），與HDL-c、cTnI、血肌酐、血尿酸、IVST、LVPWT之間的相關無統(tǒng)計學意義（p>0.05）。
　　7、循環(huán)miR-21、miR-423-5p的相對表達

17、量在對照組、CAD非左室重塑組、CAD左室重塑組漸漸升高，CAD左室重塑組明顯高于對照組和CAD非左室重塑組，差異有統(tǒng)計學意義（P值均<0.05）；CAD非左室重塑組的miR-21、miR-423-5p表達水平高于對照組（P=0.026，P<0.001）。miR-100相對表達量在對照組、CAD左室重塑組、CAD非左室重塑組緩慢升高，但各組之間差異沒有統(tǒng)計學意義（P均>0.05）。
　　8、以判斷左室重塑的各個指標單獨分組，分別比

18、較循環(huán)miR-21、miR-100、miR-423-5p相對表達量在各指標界定的左室重塑組與非重塑組之間的表達水平變化。miR-21在LVMI、LVEF和LVESV界定的左室重塑組的表達均顯著高于非左室重塑組（P分別=0.005，<0.001，=0.018），但在LVEDV界定的組別間差異無統(tǒng)計學意義（P=0.07）；miR-100在各個指標判斷的重塑組和非重塑組之間的差異均無統(tǒng)計學意義（P分別=0.512，0.221，0.796，0.

19、296）；miR-423-5p的表達水平在LVMI界定的兩組間差異無統(tǒng)計學意義（P=0.094），而在LVEF、LVESV和LVEDV界定的左室重塑組的表達較非重塑組明顯升高（P分別=0.001，0.003，0.01）。
　　9、采用受試者工作特征曲線(Receiver operating characteristic curve，ROC)評價循環(huán) miR-21、miR-100、miR-423-5p的相對表達量對冠心病患者發(fā)生左室

20、重塑的判斷價值。循環(huán) miR-21表達量的ROC曲線下面積 AUC（AUCROC）=0.717（95%CI0.654～0.779），miR-100表達水平的AUCROC=0.588（95%CI0.520～0.657）， miR-423-5p相對表達量的AUCROC=0.709（95%CI0.648～0.770）。
　　10、將CAD患者存在左室重塑（1表示左室重塑，0表示非左室重塑）作為因變量，采用多因素Logistic回歸方法分

21、析各混淆變量與左室重塑的關系。有統(tǒng)計意義的指標包括HDL-c、血肌酐、高脂血癥、高尿酸血癥（和血尿酸共線性，入選其一）、BNP、NT-proBNP、伴隨疾?。òǜ哐獕骸⑻悄虿?、心衰）、臨床用藥（包括地高辛、阿司匹林、利尿劑、ACEI/ARB、硝酸酯類、降脂藥）、循環(huán)miR-21相對表達量、循環(huán)miR-423-5p相對表達量。結果顯示miR-21相對表達量、miR-423-5p相對表達量、高血壓、BNP、NT-proBNP、使用地高辛和

22、左室重塑關系密切（p＜0.05），OR值分別為2.385（95%CI1.298～4.382）、6.025(95%CI2.603～13.943)、1.894（95%CI1.174～4.161）、2.505（95%CI1.212～5.176）、17.094(95%CI6.652～43.931)、0.295（0.099～0.879）。
　　結論：
　　1、循環(huán)m i R-21和miR-423-5p相對表達量升高可能可以甄別穩(wěn)定型冠

23、心病患者和ACS患者，而且提示兩者可能在冠心病尤其是 ACS（AMI、UA）的發(fā)病過程中起著一定作用。
　　2、 miR-21、miR-423-5p可能參與了冠心病左室重塑過程；miR-100可能與冠心病左室重塑沒有關系。
　　3、循環(huán)miR-21水平、miR-423-5p水平、患高血壓、BNP、NT-proBNP與左室重塑關系密切，提示上述指標是患者發(fā)生左室重塑的危險因素；使用地高辛也和左室重塑關系密切，地高辛可能是預防左