粉塵螨疫苗對(duì)粉塵螨變應(yīng)原誘導(dǎo)的小鼠氣道變態(tài)反應(yīng)炎癥的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：通過(guò)對(duì)哮喘模型小鼠鼻腔免疫標(biāo)準(zhǔn)化粉塵螨疫苗進(jìn)行治療，探討標(biāo)準(zhǔn)化粉塵螨疫苗對(duì)粉塵螨變應(yīng)原誘導(dǎo)的變態(tài)反應(yīng)性氣道炎癥的免疫保護(hù)作用，探討標(biāo)準(zhǔn)化粉塵螨疫苗在支氣管哮喘抗原特異性免疫治療中的機(jī)制。 方法： 1、21只4～b周齡SPF級(jí)Balb/c 小鼠分成正常對(duì)照組、哮喘模型組、標(biāo)準(zhǔn)化粉塵螨疫苗治療組。正常對(duì)照組不做處理。用粉塵螨變應(yīng)原提取液誘發(fā)哮喘制作哮喘小鼠模型，哮喘小鼠模型制作成功后用標(biāo)準(zhǔn)化粉塵螨疫苗(400μg)在小

2、鼠麻醉狀態(tài)下行鼻腔免疫，連續(xù)免疫8次，每次間隔1天，免疫結(jié)束1周以后，用50 μg/50 μl Der f變應(yīng)原滴鼻激發(fā)，每天1次，連續(xù)7次。 2、各組小鼠氣管插管進(jìn)行支氣管肺泡灌洗，觀察支氣管肺泡灌沈液(BALF)中細(xì)胞總數(shù)和細(xì)胞分類；各組小鼠取肺組織，通過(guò)HE染色(haematoxylin and eosin)觀察小鼠肺部炎癥變化。 3、各組小鼠用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)血清中IgE、IgA和IgG2a抗體

3、；檢測(cè)肺泡灌洗液中IL-10、IL-4和IFN—γ水平；同時(shí)檢測(cè)脾細(xì)胞在變應(yīng)原特異刺激下分泌的IL-10、IL-4和IFN—γ水平。 4、各組小鼠用MTT法檢測(cè)脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)。 5、各組小鼠用流式細(xì)胞儀檢測(cè)脾淋巴細(xì)胞中的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量。 6、各組小鼠均分別用PBS測(cè)基礎(chǔ)值，以1mg/ml、10mg/ml、30mg/ml、50mg/ml、100mg/ml濃度的乙酰甲膽堿激發(fā)，觀察氣道高反應(yīng)性Penh值的變化。

4、 結(jié)果： 1、哮喘模型組小鼠激發(fā)后可見(jiàn)咳嗽、喘息、呼吸加深加快，煩躁不安等癥狀；標(biāo)準(zhǔn)化粉塵螨疫苗治療組激發(fā)后也可見(jiàn)類似癥狀和體征，但明顯減輕。 2、正常對(duì)照組小鼠肺部無(wú)病理改變；哮喘模型組肺部出現(xiàn)明顯的變態(tài)反應(yīng)性炎癥；標(biāo)準(zhǔn)化粉塵螨疫苗治療組肺部變態(tài)反應(yīng)性炎癥較哮喘模型組明顯減輕。哮喘模型組小鼠肺泡灌洗液細(xì)胞總數(shù)為(159.60±15.08)、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)為(33.20±3.76)；標(biāo)準(zhǔn)化粉塵螨疫苗治療組肺泡灌洗

5、液細(xì)胞總數(shù)為(101.00±5.32)、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)為(18.40±2.14)。哮喘小鼠在標(biāo)準(zhǔn)化粉塵螨疫苗治療后肺泡灌洗液細(xì)胞總數(shù)和嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)都有所下降，標(biāo)準(zhǔn)化粉塵螨疫苗治療組與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。 3、哮喘模型組肺泡灌洗液中的IL-4、IL—10和IFN—γ分別為(57.30±5.02pg/ml)、(52.5±2.66pg/ml)和(53.80±1.00 pg/ml)，與之相比，標(biāo)準(zhǔn)化粉塵螨疫苗治療組

6、肺泡灌洗液中的IL-4、IL—10和IFN—γ分別為(32.00±4.42)、(135.25±1.04)、(117.00±8.43)，標(biāo)準(zhǔn)化粉塵螨疫苗治療組IL-4顯著降低(P＜0.01)，IL—1O和IFN—γ都顯著升高(P＜0.01)。 4、哮喘模型組脾細(xì)胞懸液中IL-10、IL-4和IFN—γ水平分別為(47.35±4.85)、(169.25±16.80)、(40.00±5.35)；標(biāo)準(zhǔn)化粉塵螨疫苗治療組脾細(xì)胞懸液中IL-

7、10、IL-4和IFN—γ水平分別為(65.75±5.33)、(83.25±3.71)、(76.00±7.12)；標(biāo)準(zhǔn)化粉塵螨疫苗治療組各參數(shù)與模型組比較有顯著差異(P＜0.01)。 5、與模型組相比，標(biāo)準(zhǔn)化粉塵螨疫苗治療組脾淋巴細(xì)胞增殖受到抑制(P＜0.01)。 6、與模型組相比，標(biāo)準(zhǔn)化粉塵螨疫苗治療組小鼠能明顯誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量增加(P＜0.01)。 7、與模型組相比，標(biāo)準(zhǔn)化粉塵螨疫苗治療組小鼠治療后，氣道