2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、目的:分離培養(yǎng)上海地區(qū)粉塵螨和戶塵螨,獲得不同編碼序列的重組塵螨二類變應(yīng)原,并探討其應(yīng)用價值。 方法:從過敏性疾病患者床褥采集分離粉塵螨和戶塵螨,控制培養(yǎng)溫度在25±2~C,濕度75%,采用混合培養(yǎng)基和封閉式培養(yǎng)系統(tǒng)進(jìn)行初步培養(yǎng)。在體視鏡和生物顯微鏡下對成年螨的形態(tài)進(jìn)行鑒定,并選用核糖體DNA(rDNA)的內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)2(ITS2)進(jìn)行分子鑒定,雙重鑒定確認(rèn)螨種后即可進(jìn)入大量培養(yǎng)。從成功的塵螨培養(yǎng)系統(tǒng)中分離單個孕螨進(jìn)行隔離培養(yǎng),

2、獲得純種的塵螨種群。 用RT-PCR的方法擴(kuò)增粉塵螨和戶塵螨二類(Derf2和Derp2)編碼基因,插入原核表達(dá)載體pET-19b,在大腸桿菌BL21(DE3)plysS內(nèi)進(jìn)行表達(dá),所獲得的重組蛋白用點印跡(DotBlot)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法檢測其與鼠單抗及人群血清IgG的反應(yīng)性;另用重組抗原免疫小鼠,用ELISA法檢測鼠多抗與重組二類變應(yīng)原抗原和天然塵螨粗抗原的反應(yīng)性。 結(jié)果:采集分離粉塵螨和戶塵螨,成

3、功建立戶塵螨培養(yǎng)系統(tǒng),對塵螨種群進(jìn)行“克隆化’’培養(yǎng)。獲得14個戶塵螨二類變應(yīng)原(Derp2)基因核苷酸多樣性位點,對應(yīng)的兩個重組變應(yīng)原(rDerp2-I,rDer2-III)與鼠單抗7Al親和力相似,而與鼠單抗1D8的親和力不同,與上海地區(qū)人群IgG結(jié)合力相似(r=0.8526);獲得17個粉塵螨二類變應(yīng)原(Derf2)基因核苷酸多樣性位點,對應(yīng)的兩個重組蛋白(rDerf2-I,rDerf2-V)對鼠單抗1D8和7Al的親和力相似,與

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