屋塵螨與雞蛋白交叉過敏的流行病學分析及實驗研究.pdf

1、目的：過敏反應主要由血清中免疫球蛋白 E（IgE）介導，通過效應細胞釋放生物活性介質而產(chǎn)生各種臨床表現(xiàn)，如蕁麻疹、血管神經(jīng)性水腫等。有時，即使是微量蛋白質也可引起敏感個體出現(xiàn)致命的反應。隨著對過敏性疾病的不斷研究，交叉過敏反應也逐漸引起人們的重視。所謂交叉過敏就是當兩種蛋白質在序列或結構上高度同源時，出現(xiàn)相同的抗原決定簇的幾率增高，易出現(xiàn)交叉反應。
　　檢測屋塵螨與雞蛋白之間是否存在交叉過敏、交叉過敏發(fā)生的概率以及發(fā)生交叉反應的蛋

2、白種類；屋塵螨及雞蛋白市售蛋白分子組分；比較免疫印跡法與狹縫免疫印跡法（Slot-blot）符合概率?；谀壳拔輭m螨與雞蛋白過敏的發(fā)病率高，診斷及防治難的特點，本研究成果為屋塵螨與雞蛋白過敏提供了可行且可靠的個體化治療方法，并且使臨床醫(yī)師能更好的指導過敏患者正確飲食及生活習慣。
　　方法：
　　1.流行病學調查及分析：對2015.01-2016.10就診于河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院皮膚科進行血清特異性過敏原檢測的患者進行流行病學調

3、查，并結合sIgE檢測結果進行回顧性分析。
　　2.選取塵螨特異性sIgE（specific IgE，sIgE）與總IgE（total IgE，tIgE）同時陽性血清進行狹縫免疫印跡實驗（Slot-blot），對比Slot-blot檢測結果與艾康生物技術有限公司銷售的免疫印跡法結果的一致性。
　　3.采用Slot-blot法進行交叉實驗，采用雞蛋白sIgE與tIgE同時陽性血清與屋塵螨抗原進行反應，檢測塵螨與雞蛋白是否存在交

4、叉反應及交叉概率。
　　4.采用Slot-blot進行抑制實驗，先將雞蛋白與屋塵螨sIgE陽性血清進行反應，然后再與包被的屋塵螨抗原反應，檢測屋塵螨與雞蛋白交叉抑制率和有效抑制濃度。
　　5.將屋塵螨及雞蛋白粗提取液進行聚丙烯酰氨凝膠電泳（SDS-PAGE），檢測各蛋白組分的完整性、分子量大小及所占比例。6對屋塵螨和雞蛋白粗提取液進行免疫印跡實驗（Western bolt，WB），選取屋塵螨sIgE與tIgE同時陽性血清和雞

5、蛋白血sIgE與tIgE同時陽性血清各10例為探針，檢測各組分的抗原性。
　　結果：
　　1.流行病學調查
　　1.1.本研究對2015.01-2016.10就診于河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院皮膚科的診斷為過敏反應相關性疾病的患者血清 sIgE檢測結果進行了回顧性分析。病例總數(shù)為5186例，男3100例，女2086例，年齡31.72±1.12歲，病程1周-數(shù)年，病種以蕁麻疹、濕疹及皮炎為主。其中tIgE陽性為3828例，塵螨s

6、IgE陽性患者1223例，雞蛋白sIgE陽性患者822例，其中塵螨與雞蛋白sIgE同時陽性病例達419例，塵螨與雞蛋白sIgE同時陽性病例占塵螨sIgE陽性的病例的34％。
　　1.2.過敏原 sIgE陽性病例的分布情況：塵螨1223（31.9%），雞蛋白822（21.5%），牛奶430（11.2%），牛羊肉344（9%），小麥223（5.8%），貓狗毛300（7.8%），霉菌172（4.5%），矮豚草166（4.3%），樹組合1

7、14(3%)，蟑螂109（2.8%），葎草96（2.5%），腰果花生159（4.2%），魚蝦蟹152（4%），芒果150（3.9%）。
　　2.免疫印跡法（艾康生物有限公司）與Slot-blot法實驗結果對比分析
　　60例塵螨sIgE陽性（免疫印跡法）的血清中，56例在Slot-blot實驗中顯示陽性，一致性概率達95%。
　　3.屋塵螨抗原與雞蛋白陽性血清交叉過敏反應概率（Slot-blot法）
　　將包埋于

8、PVDF膜上的屋塵螨抗原與雞蛋白sIgE陽性血清反應，隨機檢測60例，30例出現(xiàn)陽性反應，其出現(xiàn)交叉反應概率為50%。
　　4.雞蛋白對屋塵螨抗原抗體反應的交叉抑制率的檢測
　　雞蛋白對屋塵螨抗原抗體反應有明顯的抑制作用，且呈濃度依賴性，當雞蛋白干預抗原濃度為100μg/ml時，達到最大抑制率，為93%。
　　5.屋塵螨提取液與雞蛋白提取液中各蛋白組分分析
　　5.1.屋塵螨列可見3條主要條帶，分別是57kd，5

9、0kd，16kd，各組分所占比例依次是55.5%，43.4%，1.3%，其中57kd的蛋白所占比例最大。
　　5.2.雞蛋白列可見4條主要條帶，分別是75kd，44.5kd，28kd，14.3kd，各組分所占比例依次是19.6%，66%，7.7%，6.6%，其中所占比例最大的是44.5kd的條帶。
　　6.屋塵螨與雞蛋白免疫抗原性分析（WB檢測）
　　6.1.10例塵螨sIgE陽性患者的血清池為探針，50kd、57kd

10、處可見明顯陽性反應條帶，考慮是Derp10（原肌凝蛋白）和Derp4（α-淀粉酶）。
　　6.2.10例雞蛋白 sIgE陽性的患者血清池為探針。主要陽性反應條帶有3條，分別是14.3kd、44.5kd、75kd，考慮分別為溶菌酶（Lys）、卵白蛋白（OVA）和卵轉鐵蛋白（OVT）。
　　結論：
　　1.就診于我院的過敏反應相關疾病的患者，主要過敏原是塵螨組合和雞蛋白。
　　2.屋塵螨主要過敏原為Derp10（原肌