變應性鼻炎患者轉錄因子T-bet的表達特征及其對塵螨變應原體內(nèi)外刺激的反應.pdf

1、CD4輔助性T細胞的分化與疾病的關系是近年來的研究熱點。T細胞表現(xiàn)為功能上的異質(zhì)性，在不同的細胞因子、抗原呈遞細胞及抗原等因素的作用下，Th0前體細胞選擇性地向Th1或Th2細胞分化。Th1/Th2分化與多種疾病有關，如腫瘤患者出現(xiàn)典型的Th2漂移，哮喘等變態(tài)反應性疾病表現(xiàn)Th2型，校正Th1/Th2細胞平衡，可為疾病的免疫治療提供新的手段。 T-bet主要表達于CD4輔助性T淋巴細胞，是Th1特異性相關轉錄因子，因在Th1/T

2、h2分化中起著關鍵性的作用而越來越受到關注。在無致敏原刺激的情況下，T-bet單獨缺陷就能使小鼠引起氣道炎癥反應。其一是因為Th2型細胞及細胞因子失去了T-bet的抑制后過量表達；其二是T-bet的表達缺陷導致Th1分化減少和Th1相關細胞因子減少，這也就導致Th2型細胞及細胞因子相對增多。T-bet介導細胞因子和己極化的Th2細胞變化，可能為治療過敏性疾病提供了條件。 Th特異性相關轉錄因子對細胞因子平衡有重要影響，但是對細胞

3、因子以后的一些事件的作用還不清楚。比如關于轉錄因子與CD23、嗜酸細胞陽離子蛋白(eosinophilecationicproteinECP)的關系還不清楚。變應原誘導刺激對變態(tài)反應性疾病患者轉錄因子的作用研究還很膚淺。變應性鼻炎(allergicrhinitisAR)患者扁桃體、腺樣體和鼻黏膜中淋巴組織等鼻咽相關淋巴組織(nasopharyngeal-associatedlymphoidtissuesNALT)的T細胞相關轉錄因子表達

4、情況有待研究。研究變應性鼻炎患者外周血和呼吸道黏膜淋巴組織T細胞分化相關轉錄因子對從系統(tǒng)免疫和局部黏膜免疫方面探討其發(fā)生機制有著重要意義。本研究的著眼點是通過體內(nèi)外變應原的刺激，了解變應性鼻炎患者外周血中Th1特異性相關轉錄因子T-bet、CD23、ECP的變化和它們之間的相互關系。用免疫組化染色法了解AR患者NALT中的T-bet表達特征和意義。 目的：探討AR患者外周血單核細胞(peripheralbloodmonoucle

5、arcellsPBMC)中轉錄因子T-bet表達及其與CD23、ECP以及過敏癥狀評分的關系；了解AR患者經(jīng)體內(nèi)外塵螨變應原刺激后T-bet表達、CD23、ECP和過敏癥狀變化；同時了解T-bet在有AR和沒有AR的兩組人群的NALT中的表達特征和意義。 方法：采取15例健康人和60例確定為塵螨過敏的AR患者的外周血。36例患者PBMC經(jīng)50μg/ml塵螨變應原體外培養(yǎng)刺激，另24例AR患者接受了1年的應用標準化塵螨變應原的體內(nèi)

6、特異性免疫治療(specificimmunotherapySIT)。用半定量的逆轉錄聚合酶鏈反應(reversetranscriptase-polymerasechainreactionRT-PCR)分析兩組PBMC中的T-betmRNA表達情況。在培養(yǎng)和SIT前后分別用流式細胞術(flowcytometryFCM)和Unicap系統(tǒng)檢測患者CD19/CD23和ECP水平。分別用免疫組化單染色法檢測AR患者和非AR人群扁桃體腺樣體和鼻粘

7、膜中的T-bet表達，用免疫組化雙染色法檢測CD4/T-bet表達。SIT前后分別評估AR患者鼻部癥狀。 結果：塵螨變應原體外刺激36例AR患者PBMC前后，其T-bet與β-actin表達水平平均比值分別為0.45±0.13和0.44±0.11，差異沒有統(tǒng)計學意義(t=-0.675，P=0.504)。24例AR患者PBMC前后，其T-bet與β-actin表達水平平均比值分別為0.44±0.14和0.49±0.09，差異有統(tǒng)計

8、學意義(t=-2.324，P=0.029)。在對照組，該比值為0.59±0.09，顯著高于上述兩組(P=0.000)。ECP(μg/ml)和CD23(％)水平在對照組和AR組分別是4.67±1.34和25.58±17.22、5.99±2.44和13.53±5.41，P均小于0.01。42例單純AR患者和合并有哮喘的18例AR患者的T-bet、ECP、CD23和癥狀評分分別是0.49±0.12和0.33±0.09、22.45±17.28和

9、32.89±15.11、12.32±5.71和16.34±3.32、8.43±1.65和9.61±1.70，t分別是5.411、-2.224、-3.407和-2.526，各自P值分別是0.000、0.030、0.001和0.014。此外，上述4個指標沒有性別之間的差異。 T-betmRNA表達強度與過敏癥狀無關(r=-0.214，P=0.101)。然而，T-bet分別與ECP和CD23存在負相關關系(r=-0.292，P=0.0

10、23，r=-0.260，P=0.045)。過敏癥狀評分、ECP和CD23之間存在正相關，P值均小于0.05。經(jīng)SIT后，ECP和CD23水平和癥狀評分均顯著下降(t值分別為4.633、6.036和10.798，P均小于0.01)。經(jīng)SIT后，T-betmRNA表達顯著上調(diào)(t=-2.324，P=0.029)。 在AR組扁桃體、腺樣體和鼻黏膜組織中T-bet表達陽性率高于非AR組，差異有統(tǒng)計學意義，t值分別是4.038、3.860

11、和4.912，P值分別是0.044、0.049和0.027；AR組扁桃體T-bet表達不同年齡組之間存在差異(x2=7.079，P=0.029)，其中主要是成年組T-bet表達低于兒童組和青少年組；在非AR組人群扁桃體組織T-bet表達沒有年齡組之間的差異。兩組中扁桃體、腺樣體和鼻粘膜中均有CD4和T-bet表達，大多數(shù)T-bet陽性表達位于CD4+T細胞中。 結論 1.AR患者CD23和ECP水平高于非AR人群，但是T

12、-bet在AR患者的PBMC和NALT中的表達均下調(diào)。 2.AR患者經(jīng)SIT后，可以看到T-bet表達的上調(diào)和CD23以及ECP水平的下降。CD23和ECP的水平在一定程度上反應了AR患者病情的嚴重程度。 3.Th1相關轉錄因子T-bet的下調(diào)表達與AR患者系統(tǒng)和局部粘膜免疫Th1反應低下有關；T-bet對變應原體外反應低下，在塵螨特異性變應原體外刺激的變應性鼻炎患者外周血單核細胞中，轉錄因子和細胞因子的Th2優(yōu)勢不是由