M3受體阻斷藥苯環(huán)喹溴銨對小鼠氣道炎癥和重塑的作用.pdf

1、M3受體分布于炎癥細(xì)胞,氣道平滑肌和粘膜下腺,能介導(dǎo)支氣管收縮,粘液分泌和氣道重塑。苯環(huán)喹溴銨(bencycloquidium bromide,BCQB),它是一種新型的選擇性M3膽堿受體阻斷藥,可能對小鼠氣道高反應(yīng)性、氣道炎癥和氣道重塑有作用。
　　 本研究采用卵蛋白誘導(dǎo)小鼠哮喘模型,氣霧吸入BCQB,小鼠肺泡灌洗,計數(shù)灌洗液中白細(xì)胞總數(shù)和分類計數(shù),同時測定細(xì)胞因子水平。肺組織用于檢測炎癥細(xì)胞浸潤、粘膜增生、氣道重塑以及炎癥因

2、子表達(dá)。檢測小鼠氣道高反應(yīng)性,計算肺阻力和動態(tài)順應(yīng)性。小鼠連續(xù)4天吸入香煙煙霧建立模型,小鼠肺泡灌洗,計數(shù)灌洗液中白細(xì)胞總數(shù)、分類計數(shù)以及細(xì)胞因子水平。肺組織用于檢測細(xì)胞因子、趨化因子mRNA表達(dá),通過病理切片,觀察肺組織炎癥細(xì)胞浸潤。結(jié)果顯示：⑴對小鼠哮喘模型氣道炎癥的作用:與模型組比較,BCQB60、120、240μg／ml氣霧吸入給藥呈劑量依賴抑制BALF中白細(xì)胞總數(shù),抑制率分別為30.8％、45.8％和65.5％,ID50(95

3、％CI)值為133.69(106.53～167.78)μg／ml；對嗜酸性粒細(xì)胞抑制率分別為49.1％、54.0％和76.7％,ID50(95％CI)值為72.96(51.04～104.28)μg／ml；對淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞數(shù)的升高無明顯作用。病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn),模型組小鼠氣道和血管周圍炎癥細(xì)胞浸潤,特別是嗜酸性粒細(xì)胞浸潤明顯增加。與模型組比較,BCQB120和240μg／ml組、Ipra均能明顯抑制嗜酸性粒細(xì)胞浸潤。⑵對小鼠哮喘模型支氣管

4、肺組織趨化因子和細(xì)胞因子的影響:與模型組比較,BCQB240μg／m可明顯抑制Eotaxin mRNA表達(dá)；BCQB60、120、240μg／ml組呈劑量依賴抑制IL-4和IL-5 mRNA表達(dá),提高IFN-γmRNA表達(dá),也能明顯提高IFN-γ／IL-4 mRNA比值和IFN-γ／IL-5 mRNA比值。與模型組比較,BCQB60、120、240μg／ml氣霧吸入給藥均可明顯提高BALF中的IFN-γ水平,對IL-4水平無明顯影響。⑶

5、對小鼠哮喘模型氣道重塑的作用:與模型組比較,BCQB各劑量組或Ipra60μg／ml組不能明顯抑制MMP-9 mRNA表達(dá),也不能明顯增加TIMP-1 mRNA表達(dá),但BCQB120和240μg／ml組均能明顯上調(diào)TIMP-1／MMP-9 mRNA比值。卵白蛋白致敏小鼠經(jīng)7d抗原攻擊后,與對照組相比,模型組杯狀細(xì)胞明顯增生,與模型組相比較,BCQB120μg／ml,BCQB240μg／ml組和對照藥Ipra60μg／ml組均能有效減少杯

6、狀細(xì)胞比率。BCQB60μg／ml組作用不明顯。卵白蛋白致敏小鼠經(jīng)7d抗原攻擊后,與對照組相比,模型組小鼠氣道單位長度基底膜膠原沉積面積明顯升高。與模型組比較,BCQB60、120和240μg／ml呈劑量依賴抑制氣道基底膜膠原沉積,而對照藥Ipra60μg／ml組無明顯作用。⑷對小鼠哮喘模型氣道高反應(yīng)性的作用:BCQB60μg／ml、120μg／ml和240μg／ml氣霧吸入呈劑量依賴抑制乙酰甲膽堿(Mch)誘導(dǎo)的小鼠哮喘模型Raw增加

7、和Cdyn下降。與模型組比較,BCQB60μg／ml、120μg／ml和240μg／ml呈劑量依賴提高RawPC100和CdynPC25 Mch所需劑量。⑸對小鼠吸煙模型氣道炎癥細(xì)胞的影響:與模型組比較,BCQB75、150、300μg／ml氣霧吸入給藥呈劑量依賴減少BALF中白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞數(shù)目,對淋巴細(xì)胞的升高無明顯作用。病理組織學(xué)檢測,模型組小鼠氣道周圍中性粒炎癥細(xì)胞和肺泡腔巨噬細(xì)胞浸潤明顯增加。與模型組比較,BC

8、QB150、300μg／ml組和Tio150μg／ml組均能明顯抑制中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤。⑹對小鼠吸煙模型肺組織髓過氧化物酶(MPO)和超氧化物歧化酶(SOD)的影響:與模型組相比,BCQB300μg／ml組可顯著抑制肺組織中的MPO水平和升高SOD水平；對照藥Tio150μg／ml能顯著抑制肺組織中MPO水平,但不能提高SOD水平。⑺對小鼠吸煙模型肺組織炎癥因子的影響:與模型組比較,BCQB75、150和300μg／ml呈劑量依賴

9、抑制TNF-αmRNA表達(dá)；BCQB300μg／ml能顯著抑制肺組織IL—1β和IL-8 mRNA表達(dá),75和150μg／ml作用不明顯。與模型組比較,BCQB300μg／ml能顯著抑制肺組織TNF-α和IL-1β蛋白水平。⑻對小鼠吸煙模型肺組織中角質(zhì)形成細(xì)胞衍生趨化因子(KC)和巨噬細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)mRNA表達(dá)的影響:與模型組比較,BCQB75、150和300μg／ml能呈劑量依賴性抑制肺組織KC和MCP-1 mRNA表