WT1基因異常表達(dá)在陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥發(fā)病機(jī)制中的作用.pdf

1、目的:
　　了解陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥(Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria，PNH)患者WT1基因mRNA的表達(dá)水平，探討WT1基因異常表達(dá)在陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥(PNH)發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法:
　　研究對象為天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院自2013年3月至2013年12月新診斷的PNH患者11例（其中經(jīng)典型8例，AA-PNH患者3例）及正常對照8名。采用半定量RT-PCR方法檢測

2、CD59+ BMMNC及CD59-BMMNC、正常對照BMMNC中WT1 mRNA的表達(dá)情況，并分析其臨床意義。體外培養(yǎng)PNH患者骨髓CD59-細(xì)胞，采用RNA干擾(RNA interference，RNAi)技術(shù)敲低WT1基因的表達(dá)，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測敲低前后細(xì)胞周期、凋亡等生物學(xué)特征變化，進(jìn)一步探討WT1基因在PNH發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　結(jié)果:
　　1.PNH患者CD59-細(xì)胞組、CD59+細(xì)胞組及正常對照組WT1 m

3、RNA的相對表達(dá)量分別為（1.06±0.12）、（0.90±0.12）和（0.86±0.05），CD59-細(xì)胞組明顯高于PNH CD59+細(xì)胞組和正常對照組（P值均＜0.05），而PNH CD59+細(xì)胞組和正常對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。PNH患者WT1 mRNA的相對表達(dá)量與CD59-細(xì)胞數(shù)量呈顯著正相關(guān)(r=0.490，P＜0.05)，而與CD59+細(xì)胞數(shù)量無明顯相關(guān)性。
　　2.PNH患者骨髓CD59-細(xì)胞轉(zhuǎn)

4、染siRNA靶向基因WT1后，WT1基因被敲低，其mRNA表達(dá)水平下降;PNH患者空白對照組和siRNA-scr轉(zhuǎn)染組細(xì)胞G0/G1期分別（92.73±3.71）％和(93.06±4.14)％，S期分別（6.99±3.61）％和（6.73±4.08）％;siRNA-WT1轉(zhuǎn)染組細(xì)胞G0/G1期為（94.46±3.71）％，S期細(xì)胞減低為（5.40±3.55）％，該組G0/G1期和S期比例與空白對照組和siRNA-scr轉(zhuǎn)染組比較差別均具

5、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。siRNA-WT1轉(zhuǎn)染組細(xì)胞凋亡率較空白組和siRNA-scr轉(zhuǎn)染組凋亡率明顯增加[（35.91±22.36）％VS（26.12±17.10）％VS(27.39±18.99)％](P＜0.05)
　　結(jié)論:
　　PNH患者CD59-細(xì)胞中WT1基因高表達(dá)，提示該基因?qū)NH異?？寺】赡芷鸬酱龠M(jìn)其增殖的作用。siRNA-WT1能有效抑制PNH患者CD59-細(xì)胞中WT1基因的表達(dá)，WT1基因表達(dá)下降