埃克替尼在矽肺纖維化發(fā)展中的體外干預(yù)作用.pdf

1、目的:觀察?？颂婺釋Χ趸?SiO2)致肺上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化中E鈣粘蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌激動蛋白(α-SMA)表達(dá)的影響，并探討表皮生長因子受體(EGFR)信號通路在肺纖維化上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用。
　　方法:采用體外制備矽肺細(xì)胞模型方法，用50ug/ml的SiO2粉塵刺激肺泡巨噬細(xì)胞(AM)，分別作用3、6、12、18、24、36h后收集上清液，用ELISA方法檢測上清中TGF-β1蛋白的表達(dá)，并以TGF-β1

2、表達(dá)的高峰時間點(diǎn)(Tm)的AM培養(yǎng)上清作為條件培養(yǎng)上清。用終濃度分別為0（對照組）、50、100、200ug/ml的SiO2粉塵與AM培養(yǎng)上清液(Tm)共同刺激肺上皮細(xì)胞，作用48h后，用?？颂婺岣深A(yù)染塵肺上皮細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)分組:正常對照組（N組，SiO2粉塵濃度為0ug/ml）、模型組（F組，SiO2粉塵濃度為200ug/ml）、低劑量干預(yù)組（A1組，SiO2粉塵濃度為200ug/ml+埃克替尼濃度20umol/L）、中劑量干預(yù)組（A2組

3、，SiO2粉塵濃度為200ug/ml+?？颂婺釢舛?0umol/L）、高劑量干預(yù)組（A3組，SiO2粉塵濃度為200ug/ml+?？颂婺釢舛?0umol/L），干預(yù)48h后，于倒置光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，并收集不同時段細(xì)胞，用RT-PCR檢測E-cadherin、α-SMA、EGFR mRNA表達(dá)水平，細(xì)胞免疫熒光方法檢測E-cadherin、α-SMA及EGFR蛋白表達(dá)的變化。
　　結(jié)果:染塵組AM培養(yǎng)上清液中TGF-β1

4、蛋白的表達(dá)在各時間點(diǎn)均明顯高于對照組，且隨作用時間的延長呈先升高后降低的趨勢，18h水平最高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。倒置顯微鏡觀察肺上皮細(xì)胞經(jīng)SiO2處理后細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)間質(zhì)細(xì)胞特點(diǎn)，由鵝卵石狀轉(zhuǎn)變?yōu)榧忓N型或梭型，偽足樣改變，似成纖維細(xì)胞，SiO2濃度為200ug/ml時最明顯;?？颂婺岣深A(yù)48h后，進(jìn)展停滯，纖維狀偽足變短，呈類圓形。體外細(xì)胞染塵，隨著SiO2濃度的升高，E-cadherin mRNA和蛋白表達(dá)逐漸下調(diào)，在

5、200ug/ml組表達(dá)最低，α-SMA、EGFR mRNA和蛋白表達(dá)逐漸上調(diào)，200ug/ml組α-SMA表達(dá)最高;實(shí)驗(yàn)組50、100、200ug/ml與對照組的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。?？颂婺岣深A(yù)后，E-cadherin mRNA和蛋白表達(dá)無明顯變化，F(xiàn)組、A1組、A2組、A3組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，與N組之間差異顯著(P＜0.05);α-SMA mRNA和蛋白表達(dá)明顯下調(diào)，信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白EGFR mRNA和