黃芪甲苷對海人酸腦損傷大鼠海馬細胞增殖的影響和神經(jīng)保護作用的研究.pdf

1、目的:癲癇是由大腦神經(jīng)元反復超同步放電致反復性驚厥發(fā)作為特征的一種神經(jīng)系統(tǒng)常見疾病。癲癇發(fā)作能造成神經(jīng)元損傷已被廣泛認可,而另一方面多種外部因素的改變,比如癲癇、帕金森病等可以影響發(fā)育中的和成年嚙齒類動物的神經(jīng)元的產(chǎn)生。近年成年哺乳動物海馬神經(jīng)發(fā)生的調控機制的研究顯示,局部微環(huán)境控制了神經(jīng)發(fā)生,此認識在理解神經(jīng)干細胞如何增殖、分化,最終整合到成熟的神經(jīng)環(huán)路中有重要作用。黃芪甲苷是從黃芪中提取的有效單體成分,具有抗氧化、抗應激、抗炎、免疫

2、調節(jié)、健腦益智等多種藥理作用,故此實驗希望進一步了解黃芪甲苷對大鼠癲癇模型(海人酸KA模型)是否具有促進海馬細胞增殖作用基礎上,進一步明確黃芪甲苷對在體癲癇大鼠的神經(jīng)保護作用。
　　 方法:本研究將SD大鼠隨機分為假手術組、模型組、黃芪甲苷干預組,應用立體定向腦室內微量注射的方法建立KA誘導的大鼠癲癇模型。采用Morris水迷宮實驗觀察大鼠學習記憶能力的影響:尼氏染色觀察大鼠海馬神經(jīng)元的形態(tài)及數(shù)目改變；BrdU和免疫組織化學方法

3、來觀察大鼠海馬齒狀回顆粒細胞下層BrdU陽性細胞數(shù)目及海馬齒狀回區(qū)星形膠質細胞數(shù)目的變化；觀察黃芪甲苷干預對海馬細胞增殖的影響及對腦損傷后的保護作用,為進一步研究癲癇有效治療方式提供動物實驗依據(jù)。
　　 結果:1、Morris水迷宮實驗(1)定位航行試驗:各時間點第1天,假手術組與模型組、黃芪甲苷干預組比較有顯著差異(p<0.01),而模型組與黃芪甲苷干預組比較無統(tǒng)計學意義(p>0.05)；第2天,與假手術組的逃避潛伏期比較,模

4、型組逃避潛伏期明顯延長(p<0.05)；黃芪甲苷干預組的逃避潛伏期較模型組無差異(P>0.05)。第3-5天,模型組大鼠的逃避潛伏期與假手術組及黃芪甲苷干預組比較逃避潛伏期明顯延長(P<0.05)；(2)空間探索試驗結果:模型組大鼠120s內穿越平臺區(qū)域的次數(shù)明顯低于假手術組(P<0.01)；黃芪甲苷干預組大鼠120s內穿越平臺區(qū)域的次數(shù)與模型組比較增多(P<0.05)；2、致癇后海馬尼氏染色可見模型組CA1區(qū)神經(jīng)元內尼氏小體脫失明顯,

5、通過存活細胞計數(shù)顯示各時間點黃芪甲苷可以減輕上述損傷,差異有統(tǒng)計學意義；3、神經(jīng)膠質纖維蛋白(GFAP)免疫組織化學結果顯示:各組海馬齒狀回區(qū)及皮層均可見GFAP免疫反應陽性星形膠質細胞,陽性細胞呈棕褐色,細胞形態(tài)如蜘蛛,有突起,突起上有分支,對分布較多的DG區(qū)進行觀察顯示各時間點黃芪甲苷藥物干預組較假手術組及癲癇模型組GFAP免疫反應陽性星形膠質細胞減少,差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)；4、BrdU免疫組織化學染色研究顯示各時間點黃

6、芪甲苷藥物干預組較假手術組及癲癇模型組海馬齒狀回區(qū)細胞增殖數(shù)目增加(p<0.05),有統(tǒng)計學意義。
　　 結論:1.KA導致大鼠出現(xiàn)典型的癲癇樣行為學表現(xiàn)和特征性腦電圖改變并造成海馬神經(jīng)元變性、死亡,細胞結構瓦解等損傷。充分說明大鼠KA快速點燃模型的建立是成功的。對進一步研究癲癇的發(fā)病機制和篩選抗癲癇藥物提供了理想的動物模型。2.KA致癇后可造成KA模型大鼠的認知與記憶能力有明顯下降。其改變可能與海馬神經(jīng)元變性、死亡,細胞結構瓦