構(gòu)建同種異體組織工程骨及修復(fù)大動(dòng)物骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、學(xué)校代碼：學(xué)號(hào)：10023B2009172中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文構(gòu)建同種異體組織工程骨及修復(fù)大動(dòng)物骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究TheConstructionofAIIogeneicTissue—EngineeredBoneandRepairofBoneDefectsinaLargeAnimalModel所院：整形外科醫(yī)院姓名：導(dǎo)師：武京國(guó)武尿國(guó)曹誼林教授導(dǎo)師小組：曹誼林，肖苒，王黔學(xué)科專(zhuān)業(yè)：外科學(xué)(整形外科)研究方向：完成日期：骨

2、組織工程20125基金項(xiàng)目：北京市科委科技計(jì)劃重大項(xiàng)目資助，課題名稱(chēng)：組織工程骨的臨床應(yīng)用研究(編號(hào)：D090800046609003)中吲阪學(xué)科學(xué)院北京叭f(wàn)flf竺蘭墮墮：!型!!；竺!絲壘：星一————————————————————————————————————————————————————————————————一。一一摘要目的：同種異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(allogeneicbonemesenchymalstemcells，

3、allo—BMSCs)體內(nèi)移植后是否完全免疫豁免和發(fā)揮生物學(xué)作用，目前還存在爭(zhēng)議。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用alloBMSCs復(fù)合生物材料構(gòu)建組織工程骨(tissue—engineeredbone，TEB)并植入比格犬皮下，研究同種異體TEB(alloTEB)異位移植后的成骨能力，并檢測(cè)受體的免疫反應(yīng)。同時(shí)建立比格犬下頜骨標(biāo)準(zhǔn)骨缺損模型，探索應(yīng)用allo—TEB修復(fù)下頜骨缺損的可行性并檢測(cè)修復(fù)過(guò)程中受體的免疫反應(yīng)。方法：(1)體外分離培養(yǎng)比格犬BMSC

4、s，向成骨、成軟骨和成脂方向誘導(dǎo)分化并鑒定。應(yīng)用電鏡掃描觀(guān)察BMSCs在珊瑚支架材料上的生長(zhǎng)。(2)裸鼠體內(nèi)應(yīng)用增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)和CM—Dil標(biāo)記比格犬BMSC進(jìn)行示蹤研究。MTT法檢測(cè)BMSCs標(biāo)記后的增殖能力。標(biāo)記BMSC復(fù)合珊瑚支架植入裸鼠體內(nèi)，術(shù)后4、8和12周取材，通過(guò)免疫組織化學(xué)和熒光顯微鏡觀(guān)察的方法示蹤植入體內(nèi)的BMSC，并通過(guò)組織學(xué)觀(guān)察標(biāo)記細(xì)胞一珊瑚支架復(fù)合物的異位成骨能力。(3)實(shí)驗(yàn)分組：應(yīng)用PCR的方法

5、分析比格犬MHCI類(lèi)基因的不同，并結(jié)合混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)(MLC)對(duì)犬不同個(gè)體基因錯(cuò)配進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分組。(4)同種異體比格犬BMSCs體內(nèi)異位構(gòu)建TEB：比格犬BMSCs分別復(fù)合珊瑚和13TCP支架材料后體外成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)1周，植入自體、異體比格犬皮下，空白材料植入作為陰性對(duì)照。術(shù)后3、7、14、28和56天通過(guò)組織學(xué)評(píng)價(jià)alloTEB的成骨能力，并檢測(cè)犬外周血白介素的含量。(5)同種異體比格犬BMSCs體內(nèi)原位構(gòu)建TEB修復(fù)骨缺損：建立比格犬

6、右側(cè)下頜骨標(biāo)準(zhǔn)全層骨缺損模型(長(zhǎng)度為3cm)，應(yīng)用構(gòu)建的自體、異體BMSC支架復(fù)合物原位移植修復(fù)缺損，空白材料植入作為陰性對(duì)照，自體骨移植作為陽(yáng)性對(duì)照。術(shù)后24周通過(guò)影像學(xué)、大體觀(guān)察、生物力學(xué)和組織學(xué)評(píng)價(jià)下頜骨缺損的修復(fù)質(zhì)量，并于3、7、14、28和56天檢測(cè)犬外周血免疫相關(guān)細(xì)胞因子的含量以及淋巴細(xì)胞分犁。結(jié)果：(1)BMSCs培養(yǎng)和復(fù)合支架：比格犬骨髓中分離出的BMSCs能夠向骨、軟骨和脂肪方向分化，復(fù)合珊瑚支架可在三維環(huán)境中黏附生長(zhǎng)