酮康唑異構(gòu)體的手性拆分及血漿中測(cè)定方法研究.pdf

1、酮康唑（Ketoconazole）是一種有效的口服咪唑類手性合成藥物，可以用于治療淺部和深部真菌感染。研究表明：它的兩個(gè)對(duì)映體具有不同的藥理活性，左旋酮康唑比右旋酮康唑的藥理活性大2～4倍，在抑制細(xì)胞色素P-450時(shí)更有效。目前根據(jù)其外消旋體的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)指導(dǎo)臨床用藥，但是由此得到的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)不能真正反映出其有效治療劑量、有效給藥時(shí)間，得出的結(jié)論與療效有時(shí)不一致，甚至誤導(dǎo)臨床用藥。因此有必要尋找一種分離分析方法來拆分并檢測(cè)酮康唑兩

2、種對(duì)映異構(gòu)體，并在此基礎(chǔ)之上研究其對(duì)映體在血漿樣品中的含量，從而建立酮康唑?qū)τ丑w的藥代動(dòng)力學(xué)，以保證酮康唑臨床治療的安全性和有效性，為質(zhì)量控制等方面提供有效依據(jù)。 本實(shí)驗(yàn)在以下幾個(gè)方面進(jìn)行了研究： 一、使用磺丁基醚-β-環(huán)糊精作為手性添加劑拆分酮康唑?qū)τ丑w 本實(shí)驗(yàn)采用反相C18鍵合固定相，在流動(dòng)相中加入手性選擇劑實(shí)現(xiàn)了酮康唑?qū)τ丑w的拆分，并對(duì)影響酮康唑手性拆分的環(huán)糊精的種類和濃度、流動(dòng)相pH值、柱溫以及甲醇和磷酸

3、鹽溶液的體積比等主要因素進(jìn)行了研究。 結(jié)果表明，采用磺丁基醚-β-環(huán)糊精作為手性流動(dòng)相添加劑時(shí)，可以成功進(jìn)行酮康唑外消旋體的拆分，得到最佳的色譜條件為：流動(dòng)相V（甲醇）：V（磷酸鹽緩沖溶液）=60：40（1．0mmol/L磺丁基醚-β-環(huán)糊精，0．02％三乙胺），磷酸調(diào)節(jié)pH值至3．00，流速：1．00mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：225nm，進(jìn)樣量：20μL，柱溫：30℃。在此條件下，酮康唑?qū)τ丑w可以在6min之內(nèi)實(shí)現(xiàn)基線分離，分離

4、度達(dá)2．05。 二、建立家兔血漿中酮康唑?qū)τ丑w的測(cè)定方法 以尼龍微孔濾膜作為萃取介質(zhì)，制備固相萃取器，依次用甲醇、水活化尼龍微孔濾膜，甲醇洗脫，提取家兔血漿中酮康唑。流動(dòng)相中加入磺丁基醚-β-CD，高效液相色譜-紫外法檢測(cè)。 為了建立高效率的萃取方法，考察了相關(guān)的主要影響因素。首先，考察了不同pH條件下的絕對(duì)回收率；其次，在待萃取溶液中加入NaCl，研究NaCl的加入量對(duì)絕對(duì)回收率的影響；最后針對(duì)洗脫溶劑種類和體

5、積進(jìn)行了考察。通過對(duì)相關(guān)影響因素的優(yōu)化，建立了家兔血漿中酮康唑?qū)τ丑w的測(cè)定方法，專屬性好，血漿中雜質(zhì)不干擾樣品的測(cè)定。并通過對(duì)檢出限（40ng/mL，S/N=3）、線性范圍（50～400 ng/mL，r=0．999）、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（1．6％～7．6％）、提取回收率（80％～85％）等的考察，充分驗(yàn)證了所建立的家兔血漿中酮康唑?qū)τ丑w的測(cè)定方法可以進(jìn)一步研究其在生物體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)，為研究酮康唑?qū)τ丑w的立體異構(gòu)與藥效的關(guān)系、臨床安全用藥等提