尿激酶納米粒的制備及其體外釋放的研究.pdf

1、研究背景及目的：血栓性疾病主要包括深靜脈血栓形成（deep venous thromboembolism，DVT）和肺動(dòng)脈栓塞（pulmonary embolism，PE）等。DVT是血管外科常見病之一，外科大手術(shù)未采取預(yù)防措施者，DVT的發(fā)病率為25％，尸檢發(fā)現(xiàn)率為35％—52％。DVT急性期的并發(fā)癥有肺栓塞及股白腫或股青腫，慢性期將遺留血栓形成后綜合征，前者是導(dǎo)致DVT病人死亡或截肢的主要原因；后者將造成程度不一的慢性深靜脈功能不全

2、，嚴(yán)重影響患者的生活和工作能力。PE是DVT最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，大塊脫落的血栓引起肺動(dòng)脈主干或大的分支栓塞，可導(dǎo)致病人在短期內(nèi)死亡。 目前國內(nèi)外治療DVT的方法較多，主要有：抗凝、溶栓（包括經(jīng)外周靜脈全身給藥溶栓和經(jīng)導(dǎo)管局部給藥溶栓）、手術(shù)取栓和微創(chuàng)介入治療。以上治療方法雖然對(duì)深靜脈血栓形成均有一定的治療作用，但都難以達(dá)到理想的療效，同時(shí)也都存在各自的副作用。因此，探索DVT新的治療方法就成為解決問題的關(guān)鍵。 尿激酶（u

3、rokinase，UK）是臨床上常用的溶栓藥物，但該藥具有較強(qiáng)的引起出血的傾向，在一定程度上限制了其臨床應(yīng)用。如能將尿激酶制備成具有緩釋作用的納米粒（nanoparticle，NP），理論上可減輕其出血傾向的副作用，提高治療效果。 納米科學(xué)自20世紀(jì)被發(fā)現(xiàn)之后，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究已取得大量卓越的成績。通過抗癌藥物的靶向治療、納米磁靶向動(dòng)態(tài)成像、納米粒靶向基因治療等研究，證明納米粒具有很好的靶向性、緩釋性以及其本身的可修飾性，使得藥

4、物在靶器官的濃度明顯增加，半衰期顯著延長，藥物的毒副作用大大減少。然而，在血管疾病的研究方面，以載藥納米粒溶栓的研究在國內(nèi)外報(bào)道仍然較少。 由于聚乳酸/乙醇酸共聚物（poly lactic—co—glycolic acid，PLGA）具有以下一些性質(zhì)，選擇其作為尿激酶的載體，使其適合應(yīng)用于控制給藥及靶向治療：PLGA的生物相容性和可降解性；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究表明其靜注給藥后在血液中具有持久性；PLGA不僅對(duì)親脂性藥物具有很好的包封性質(zhì)

5、，而且對(duì)蛋白質(zhì)藥物也表現(xiàn)出令人滿意的包封效果；最后，制成的PLGA納米粒可以在適宜的條件下冷凍干燥成粉末后儲(chǔ)存。 本研究旨在以PLGA為包裹材料，采用復(fù)乳法制備尿激酶納米粒，進(jìn)而檢測(cè)尿激酶納米粒的各個(gè)質(zhì)量指標(biāo)，探索尿激酶納米粒的制備工藝，為傳統(tǒng)溶栓藥物治療血栓性疾病發(fā)掘新的作用途徑。 方法：利用復(fù)乳法制備尿激酶納米粒；采用纖維蛋白平板法檢測(cè)尿激酶含量，繪制尿激酶標(biāo)準(zhǔn)曲線并對(duì)樣品尿激酶進(jìn)行定量，進(jìn)而檢測(cè)尿激酶納米粒的載藥量

6、、包封率；利用正交設(shè)計(jì)優(yōu)化尿激酶納米粒制備工藝，篩選出最佳工藝處方及實(shí)驗(yàn)條件：以掃描電鏡觀察其微觀形態(tài)，激光粒度分析儀檢測(cè)其大小及分布；最后考察尿激酶納米粒的體外釋藥。 結(jié)果：尿激酶納米粒的平均粒徑為132nm，跨距為170nm，包封率為84．70±1．67％，載藥量為4．01±0．16％；電鏡結(jié)果顯示，外形圓整，呈球形，分散良好；其體外釋藥實(shí)驗(yàn)表明UK—NP能夠持續(xù)釋放UK達(dá)12d以上，具有明顯的緩釋效應(yīng)。尿激酶體外釋放的速度

7、取決于PLGA分子量的大?。旱头肿恿縋LGA（2萬）形成的納米粒比高分子量的PLGA（4萬）形成的納米粒釋放尿激酶的速度較快。 結(jié)論: 1．利用復(fù)乳法能成功制備UK—NP，其制作的納米粒外形圓整，分散性良好。 2．UK-NP的包封率與PLGA分子量及濃度、UK濃度、超聲功率、PVA濃度均有關(guān)系。 3．凍干前后納米粒的粒徑、包封率和載藥量沒有顯著的變化，低壓冷凍干燥是UK-NP可行的干燥方法。 4．