外源性TGF-β3對大鼠肝星狀細胞內源性TGF-β3表達及其增殖的影響.pdf

1、目的：轉化生長因子-β（transforming growth factor，TGF-β）是一種多功能的多肽類細胞因子超家族，幾乎體內所有細胞都能分泌TGF-β并存在其受體，在細胞的生長調節(jié)中起重要作用。TGF-βl是最重要的致纖維化因子，而TGF-β3則有拮抗TGF-βl的作用。研究發(fā)現TGF-β3在肝臟中具有抗肝纖維化功能。為了促進機體內內源性TGF-β3的大量表達，本實驗應用外源性重組細胞因子TGF-β3干預大鼠肝星狀細胞（Hep

2、atic stellate cell，HSC），通過檢測HSC中TGF-β3mRNA、蛋白的表達水平及HSC的增殖，探討外源性TGF-β3對HSC分泌內源性TGF-β3及HSC增殖的影響。
　　 方法：體外培養(yǎng)HSC，加入外源性TGF-β3（10ng/ml）培養(yǎng)的細胞為TGF-β3組，未加入外源性TGF-β3培養(yǎng)的細胞為對照組，（1）分別在1h、2h、4h、12h和24h收集細胞，應用實時熒光定量PCR法檢測內源性TGF-β3

3、mRNA表達；（2）分別在0h、1h、6h和12h收集細胞，應用western-blot法檢測細胞內TGF-β3蛋白的表達；（3）分別在0h、2h、4h、8h、14h和24h收集細胞，應用ELISA法檢測細胞外總TGF-β3蛋白的表達；加入外源性TGF-β3培養(yǎng)HSC 2h，然后換用無TGF-β3的DMEM培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)細胞至2.25h、2.5h、3h、4h、6h、10h和14h收集細胞上清液，應用ELISA法檢測細胞外內源性TGF-β

4、3蛋白的表達。（4）外源性TGF-β3對HSC增殖的影響：將HSC接種于96孔板，培養(yǎng)6h后，分為A、B兩組，A組用不同濃度的外源性TGF-β3干預HSC，24h后用MTT法檢測細胞增殖情況，B組用5ng/ml外源性TGF-β3干預HSC，在24h和48h時用MTT法檢測細胞增殖情況；（5）細胞形態(tài)分析：倒置顯微鏡下觀察對照組和外源性TGF-β3干預組的HSC大體形態(tài)。
　　 結果：（1）加入外源性TGF-β3干預HSC后，細胞

5、內TGF-β3mRNA表達水平明顯增高，于2h達峰值（3.756±0.667：1.207±0.129），為對照組的3.11倍（P<0.05），隨后緩慢降低，維持在1.56倍水平達10h之久，24h時(1.375±0.131：1.066±0.085)表達水平仍為對照組的1.30倍（P＜0.05）；（2）不同時間點細胞內TGF-β3表達水平無顯著變化（P>0.05）；（3）細胞外總TGF-β3含量明顯增加，于4h時達高峰（18.931±2.

6、904：10.026±0.022ng/ml），約為干預量的1.89倍，隨后開始下降；內源性TGF-β3于干預后3h達高峰(0.835±0.027：0.026±0.022ng/ml)，為對照組的32.36倍，之后開始逐漸降低，直至維持一個弱增長的表達狀態(tài)（P<0.05）。（4）低濃度的外源性TGF-β3（0.001-0.08ng/ml）不影響HSC的增殖，從0.32ng/ml開始，外源性TGF-β3可促進HSC的增殖，HSC的增殖與外源性