EGFR shRNA表達(dá)載體的構(gòu)建及對(duì)卵巢癌移植瘤放療敏感性的影響.pdf

1、第一部分：EGFR shRNA表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定 目的：構(gòu)建針對(duì)EGFR基因家族序列特異性的shRNA表達(dá)載體，為本課題下一步研究提供有力工具。 方法：選擇放療不敏感的卵巢癌SKOV3細(xì)胞中高表達(dá)的EGFR基因?yàn)榘谢?，根?jù)siRNA的設(shè)計(jì)原則，設(shè)計(jì)針對(duì)EGFR基因序列的特異性表達(dá)載體（pGensil-1-E）及非特異性表達(dá)載體（pGensil-1-N）。體外合成兩段編碼短發(fā)夾RNA序列的DNA單鏈，退火，克隆到質(zhì)粒載

2、體pGensil-1的polⅢ啟動(dòng)子下游，經(jīng)限制性內(nèi)切酶酶切和DNA測(cè)序進(jìn)行鑒定。 結(jié)果：經(jīng)酶切和DNA測(cè)序表明，成功構(gòu)建了EGFR家族同源性基因的表達(dá)載體，pGensil-1-E及pGensil-1-N。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建了針對(duì)EGFR家族同源性基因的表達(dá)載體。 第二部分 RNAi沉默EGFR基因?qū)β殉舶┮浦擦龇暖熋舾行缘挠绊?目的：應(yīng)用RNAi技術(shù)，將序列特異性的EGFR shRNA表達(dá)載體轉(zhuǎn)染卵

3、巢癌移植瘤，觀察EGFR基因?qū)β殉舶┓暖熋舾行缘挠绊憽?方法：應(yīng)用卵巢癌SKOV3細(xì)胞建立裸鼠移植瘤模型，隨機(jī)分為對(duì)照組、單純放療組、放療+pGenesil-1-E組，采用6MV X線照射裸鼠瘤組織，監(jiān)測(cè)三組瘤體積，治療后測(cè)量瘤質(zhì)量，取瘤組織行RT-PCR、Western Blot、免疫組化、電鏡檢測(cè)。 結(jié)果：治療后三組腫瘤體積差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），單純放療組、放療+pGenesil-1-E組的抑瘤率分別為