直接接觸HS-5基質(zhì)細(xì)胞可降低急性紅白血病HEL細(xì)胞的藥物敏感性.pdf

1、目的：探討與骨髓基質(zhì)HS-5細(xì)胞直接接觸對(duì)HEL白血病細(xì)胞耐藥性的誘發(fā)作用及其機(jī)制。
　　方法：采用人急性紅白血病HEL細(xì)胞株與骨髓基質(zhì)HS-5細(xì)胞共培養(yǎng)模式模擬體內(nèi)白血病細(xì)胞及其周?chē)脑煅h(huán)境，應(yīng)用CCK-8法檢測(cè)HEL細(xì)胞對(duì)Ara-c，DNR，VP16，MTX化療藥物的敏感性，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HEL細(xì)胞周期時(shí)相分布，Real-time RT-PCR方法檢測(cè)p19、p21、p27、MDR1、ABCG2、bcl-2基因的mRNA表

2、達(dá)，Western Blot方法檢測(cè)t-Akt、p-Akt Ser473、p-GSK3βSer9、p-STAT3 Tyr705、Bcl-2、cleaved-Notch1V1754及Hes1蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：與HS-5細(xì)胞共培養(yǎng)后的HEL細(xì)胞對(duì)四種化療藥物的敏感性均顯著降低。在共培養(yǎng)24h時(shí)，HEL細(xì)胞阻滯于G0/G1期，G0/G1期的細(xì)胞比例明顯增多。PCR結(jié)果顯示p21基因的轉(zhuǎn)錄水平隨著共培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸上調(diào)；p19基因的

3、mRNA水平在12h時(shí)明顯下調(diào)，隨后又恢復(fù)；其它基因的改變均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Western Blot結(jié)果表明共培養(yǎng)后HEL細(xì)胞的p-Akt Ser473、p-GSK3βSer9、cleaved-Notch1V1754蛋白及Bcl-2蛋白表達(dá)上調(diào)，Hes1蛋白表達(dá)下調(diào)，p-STAT3 Tyr705表達(dá)無(wú)明顯變化。
　　結(jié)論：與骨髓基質(zhì)HS-5細(xì)胞的直接接觸可增強(qiáng)HEL細(xì)胞對(duì)化療藥物的抵抗作用。本研究結(jié)果將有助于揭示骨髓微環(huán)境對(duì)白血病細(xì)