生育三烯酚誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞死亡的死亡方式及機(jī)制研究.pdf

1、分類號：R114密級：學(xué)位類別：科學(xué)學(xué)位團(tuán)專業(yè)學(xué)位口◇學(xué)校代碼；10062學(xué)號：2010602147學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)又坪暑科^號碩士學(xué)位論文MASTER’SDISSERTATIoN論文題目：生育三烯酚誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞死亡的死亡方式及機(jī)制研究TITLEMannerandmechanismofdeathtocotrienolinducedoncoloncancercells一級學(xué)科：公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué)二級學(xué)科：衛(wèi)生毒理學(xué)論文作者：馬躍指導(dǎo)教師：

2、王風(fēng)山研究員導(dǎo)師組成員：張靜姝副研究員天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一三年五月天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要目的本研究旨在通過體外培養(yǎng)人結(jié)腸癌SW620細(xì)胞、HCT8細(xì)胞，利用分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，通過多個(gè)角度證實(shí)生育三烯酚誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞死亡的死亡方式為paraptosis樣死亡，并以paraptosis樣死亡方式為中心，探討生育三烯酚誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞發(fā)生的機(jī)制。方法1生育三烯酚誘導(dǎo)人結(jié)腸癌細(xì)胞死亡的方式研究體外培養(yǎng)人結(jié)腸癌細(xì)胞，加入不同劑量的

3、6一生育三烯酚(1、25、5、10、15、20、25、30和401xmol／L)和乙醇(溶劑對照)作用24h后，以MTT實(shí)驗(yàn)觀察6一生育三烯酚對SW620細(xì)胞存活率的影響；按照5、10、15、20“mol／L6一生育三烯酚作用于細(xì)胞，以熒光染色(AO／EB染色，DAPI染色)觀察細(xì)胞死亡情況。按照20pmol／L棄lJ量加入6一生育三烯酚，通過JJ口Zparaptosis抑制劑放線菌酮觀察其對生育三烯酚作用的影響情況，來正面證實(shí)生育三烯

4、酚誘導(dǎo)人結(jié)腸癌細(xì)胞死亡的方式中存在paraptosis樣死亡。以不同劑量的6生育三烯酚作用于人結(jié)腸癌細(xì)胞SW620中，檢測細(xì)胞中caspase一3的活性，并用抗癌陽性藥物紫杉醇作為腫瘤細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑作用于SW620細(xì)胞中，利用DNALadder方法檢測細(xì)胞中DNA的降解情況，從而證實(shí)生育三烯酚誘導(dǎo)人結(jié)腸癌細(xì)胞死亡并非典型凋亡方式。利用免疫細(xì)胞化學(xué)檢測細(xì)胞中細(xì)胞自噬標(biāo)記蛋白LC3的表達(dá)情況來觀察生育三烯酚誘導(dǎo)人結(jié)腸癌細(xì)胞產(chǎn)生的這種空泡化死

5、亡現(xiàn)象與細(xì)胞自噬的關(guān)系，從而排除細(xì)胞自噬的可能，從反面證實(shí)生育三烯酚誘導(dǎo)人結(jié)腸癌細(xì)胞死亡的方式為paraptosis樣死亡。為了排除細(xì)胞系的特異性，本實(shí)驗(yàn)中增加了另一種人結(jié)腸癌細(xì)胞系，HCT8細(xì)胞。將v一生育三烯酚作用于HCT8細(xì)胞，觀察細(xì)胞死亡情況，同時(shí)檢測細(xì)胞中caspase3的活性，作為細(xì)胞系平行實(shí)驗(yàn)。26生育三烯酚誘導(dǎo)人結(jié)腸癌細(xì)胞SW620死亡的機(jī)制研究體外培養(yǎng)SW620細(xì)胞，加入的20LLmol／L6一生育三烯酚作用24h后，