腎活檢組織Perforin、GranzymeB、IDO表達(dá)對(duì)早期移植腎功能異常鑒別作用的研究.pdf

1、引言： 腎移植目前已經(jīng)成為終末期腎病患者主要的治療手段之一，隨著近年來(lái)移植免疫研究的不斷深入和新型免疫抑制劑的不斷問(wèn)世，急性排異發(fā)生率顯著下降，一年移植物的存活率得到了明顯的提高，但是由于急性排異不僅可以引起移植物早期失功，而且對(duì)后期慢性移植物腎病和移植物長(zhǎng)期存活有直接的影響，急性排異仍然是術(shù)后主要并發(fā)癥之一。在新型免疫抑制方案下，急性排異臨床表現(xiàn)發(fā)生了很大的變化，移植腎區(qū)疼痛、少尿、血尿、發(fā)熱、血壓升高等傳統(tǒng)表現(xiàn)多不典型，移植

2、物的常規(guī)病理活檢已經(jīng)成為急性排異診斷的主要方法，但常規(guī)病理活檢存在著它自身的局限性，很難診斷術(shù)后移植腎功能異常但未達(dá)到Banff病理診斷標(biāo)準(zhǔn)的早期排異，病理與臨床診斷的不一致(約5％—10％)，如：很難鑒別術(shù)后急性排異、急性腎小管損傷、Ptc等并發(fā)癥對(duì)移植腎造成的損傷。腎移植術(shù)后近期急性排異仍然是令人擔(dān)憂的并發(fā)癥，它不僅導(dǎo)致免疫抑制劑上調(diào)和相關(guān)并發(fā)癥，而且術(shù)后一年內(nèi)排異雖然不會(huì)導(dǎo)致移植腎近期失功，但30％—40％會(huì)出現(xiàn)長(zhǎng)期的移植腎功能異

3、常，降低移植腎長(zhǎng)期生存率。如何減少排異反應(yīng)發(fā)生并能盡早發(fā)現(xiàn)排異反應(yīng)，延長(zhǎng)移植腎功能顯得尤為重要。 對(duì)病理活檢進(jìn)行有益的補(bǔ)充，這已經(jīng)成為移植界新興的課題。正是基于上述原因，我們對(duì)穿孔素(Perforin)、顆粒酶B(GranzymeB)和吲哚胺2，3-雙加氧酶(IDO)在腎移植受者活檢組織中的表達(dá)進(jìn)行了研究。 材料和方法： 1.病例選擇 2001年6月～2007年7月，在本中心接受腎臟移植患者中，術(shù)后1月內(nèi)

4、血肌酐較基礎(chǔ)值升高25％以上且移植腎活檢證實(shí)為急性排異(AR)44例；病理活檢證實(shí)為急性腎小管損傷(ATI)19例；病理活檢證實(shí)為PTC內(nèi)炎細(xì)胞浸潤(rùn)但未達(dá)到Banff排異診斷標(biāo)準(zhǔn)(Ptc)14例；術(shù)后1個(gè)月左右定期活檢且移植腎功能穩(wěn)定(Ts)41例。所有的移植腎活檢病理診斷均由一位專(zhuān)門(mén)的移植病理醫(yī)生根據(jù)Banff97和Banff2005作出診斷。以上受者均為首次移植，尸體供腎，留取活檢標(biāo)本時(shí)無(wú)明顯肺部感染、尿路感染者，隨訪期間無(wú)惡性腫瘤

5、者。同時(shí)獲取118例相應(yīng)病例移植時(shí)血管剛開(kāi)放時(shí)(postperfusion)的活檢組織，所有標(biāo)本均采用福爾馬林固定、石蠟包埋保存。 2.免疫組化的方法研究急性排異者(AR)、管周毛細(xì)血管炎細(xì)胞浸潤(rùn)者(Ptc)、移植腎功能穩(wěn)定者(Ts)和急性腎小管損傷者(ATI)活檢組織穿孔素(Perforin)、顆粒酶B(GranzymeB)、IDO的表達(dá)及血管剛開(kāi)放時(shí)活檢組織IDO的表達(dá)。 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法： 所有數(shù)據(jù)采用SPS

6、S13.0軟件包，免疫組化的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，不同組間比較采用Mann—Whitney U Test檢驗(yàn)，多樣本計(jì)量資料行方差分析及LSD檢驗(yàn)(比較前行方差分析)，如方差不齊行Dunnett T3檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，確定檢驗(yàn)水準(zhǔn)為p=0.05，p<0.05時(shí)差異具有顯著性。敏感性和特異性計(jì)算分別如下：敏感性=真陽(yáng)性樣本數(shù)(TP)／[TP+假陰性樣本數(shù)]；特異性=真陰性樣本數(shù)(TN)／[TN+假陽(yáng)性樣本數(shù)]。 結(jié)果

7、： 1.移植術(shù)后急性排異組。IDO陽(yáng)性率為86.4％，陽(yáng)性積分為5.54±3.11，而這個(gè)比例跟急性腎小管損傷組(10.5％，0.79±2.42)和移植腎功能穩(wěn)定組(12.2％，0.85±2.32)相比，具有顯著性差異(P<0.0001)；管周毛細(xì)血管炎細(xì)胞浸潤(rùn)組(71.4％，4.78±3.45)跟急性排異組相比，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.233，P=0.972)；急性排異組中C4d(+)組(84.6％，5.15±3.12)和C4

8、d(一)組(88.9％，6.11±3.10)相比，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=1.000，P=0.249)；急性排異組中IA型IDO陽(yáng)性率和陽(yáng)性積分別為(90.9％，6.00±2.97)，與IIA型(80.0％，5.50±3.50)和體液性排異(87.0％，5.35±3.12)相比，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.722)；急性排異組中管周毛細(xì)血管C4d(+)組PTC陽(yáng)性細(xì)胞浸潤(rùn)率(92.3％)與C4d(一)組(55.6％)相比，具有顯著性差異(P=0

9、.008)。IDO在急性排異組、管周毛細(xì)血管炎細(xì)胞浸潤(rùn)組、急性腎小管損傷組及定期活檢移植腎功能穩(wěn)定組相應(yīng)的血管剛開(kāi)放時(shí)活檢組織表達(dá)的陽(yáng)性率與各組表達(dá)的陽(yáng)性率的一致性都達(dá)到了100％。 2.移植術(shù)后急性排異組GranzymeB陽(yáng)性表達(dá)率為100％，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為20.55±17.62，而這個(gè)比例跟急性腎小管損傷組(10.5％，0.42±1.30)和定期活檢移植腎功能穩(wěn)定組(0，0.00)相比，具有顯著性差異(P<0.0001)；管周

10、毛細(xì)血管炎細(xì)胞浸潤(rùn)組(100％，12.57±6.90)跟急性排異組相比，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.09)；急性排異組中C4d(+)組GranzymeB陽(yáng)性率和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為(100％，23.38±18.80)和C4d(一)組(100％，16.44+15.36)相比，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=o．249)；急性排異組中IA型GranzymeB陽(yáng)性率和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為(100％，15.55±16.96)，與IIA型(100％，24.50+16.46)和體

11、液性排異(100％，21.21±18.59)相比，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=o．628)。 3.移植術(shù)后急性排異組Perforin陽(yáng)性表達(dá)率為100％，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為12.48+11.39，而這個(gè)比例跟急性腎小管損傷組(10.51％，0.34±0.93)和定期活檢移植腎功能穩(wěn)定組(0，0.00)相比，具有顯著性差異(P

12、6)；急性排異組中C4d(+)組Perforin陽(yáng)性表達(dá)率和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為(100％，14.65±13.00)和C4d(一)組(100％，9.33±7.83)相比，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.214)；急性排異組中IA型Perforin陽(yáng)性率和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為(100％，7.36±4.61)，與IIA型(100％，17.60±12.04)和體液性排異(100％，13.17±12.37)相比，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=O．628)。 4.作為移植

13、腎早期急性排異的診斷的指標(biāo)，穿孔素、顆粒酶B和IDO的診斷敏感度都較高，分別為100％、100％和86.4％，但穿孔素、顆粒酶B的特異性(100％、100％)比IDO的特異性(77.4％)高。 結(jié)論： 1.移植腎急性排異時(shí)腎活檢組織穿孔素、顆粒酶B和IDO表達(dá)都上調(diào)，提示穿孔素、顆粒酶B和IDO參與急性排異。 2.Ptc組腎活檢組織穿孔素、顆粒酶B和IDO表達(dá)都上調(diào)，提示Ptc可能是極早期的排異反應(yīng)。 3

14、.急性腎小管損傷組腎活檢組織穿孔素、顆粒酶B、和IDO表達(dá)沒(méi)有明顯上調(diào)，提示急性腎小管損傷可能為非免疫因素造成的損傷。 4.通過(guò)對(duì)血流開(kāi)放后半小時(shí)左右與再次活檢的結(jié)果對(duì)照，前后一致性較好(100％)，提示IDO可能是較早期預(yù)測(cè)排異的標(biāo)記物。 5.腎活檢組織穿孔素、顆粒酶B和IDO的檢測(cè)可能是術(shù)后早期排異的輔助診斷指標(biāo)，并且可以把免疫因素和非免疫因素對(duì)移植腎造成的損傷加以鑒別。 6.穿孔素、顆粒酶B和IDO在C4d