PCR-反向點(diǎn)雜交法與DNA直接測序法檢測HBV耐藥變異與基因型的比較研究.pdf

1、目的:
　　 用PCR-反向點(diǎn)雜交法和DNA直接測序法兩種方法檢測乙型肝炎病毒基因耐藥位點(diǎn)的突變情況以及基因型，并進(jìn)行比較分析，進(jìn)一步證實(shí)PCR-反向點(diǎn)雜交法是一種快速，準(zhǔn)確發(fā)現(xiàn)核苷類藥物治療后耐藥位點(diǎn)的檢測方法。同時(shí)將檢測結(jié)果與臨床資料進(jìn)行分析，進(jìn)一步探討乙型肝炎病毒耐藥變異與基因型、肝功能檢測指標(biāo)、HBVDNA病毒載量等的相關(guān)性。
　　 方法:
　　 收集102例服用核苷類藥物治療的慢性乙型肝炎患者血清標(biāo)本，

2、采用PCR-反向點(diǎn)雜交法和DNA直接測序法檢測HBV的耐藥突變位點(diǎn)以及基因型，并對HBV耐藥變異與基因型、肝功能檢測指標(biāo)、HBV DNA病毒載量等指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　 結(jié)果:
　　 1.兩種檢測方法準(zhǔn)確度比較:在102例服用核苷類藥物的慢性乙型肝炎患者血清中，PCR-反向點(diǎn)雜交法檢出耐藥突變株79例，變異率為77.5％;其中180M和204I突變株48例，占60.8％;204V突變株22例，占27.8％;181V突

3、變株9例，占11.4％; HBV基因型中B基因型10例，C基因型84例，D基因型1例。DNA-直接測序法檢出耐藥變異株84例，其變異率為82.4％，共檢出5種變異位點(diǎn)，其中分別為180M和204I突變株50例，占59.5％;204V突變株24例，占28.6％;181V突變株9例，占10.7％;202G1例，占1.2％。其中12份標(biāo)本為B型，占11.8％;89份標(biāo)本為C型，占87.3％;1份標(biāo)本為D型，占0.9％。兩種方法的準(zhǔn)確度經(jīng)x2檢

4、驗(yàn)，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 2.兩種檢測方法靈敏度的比較:HBV DNA水平在＜1000copies/ml的血清中，PCR-反向點(diǎn)雜交法無法檢出突變株;DNA-直接測序法檢出耐藥突變株5例。在相同HBV DNA檢測水平下，PCR-反向點(diǎn)雜交法和DNA直接測序法能同時(shí)檢出變異株與野生株，兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3.將檢測結(jié)果與臨床資料進(jìn)行相關(guān)性分析:乙肝患者的耐藥變異位點(diǎn)與基因型、肝功能

5、指標(biāo)無相關(guān)性(P＞0.05)，與HBV DNA病毒載量有一定相關(guān)性(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.PCR-反向點(diǎn)雜交法靈敏度和準(zhǔn)確度與DNA直接測序法（金標(biāo)準(zhǔn)方法）檢測相符率高。
　　 2.PCR-反向點(diǎn)雜交法是一種快速，準(zhǔn)確發(fā)現(xiàn)核苷類藥物治療后耐藥位點(diǎn)的檢測方法。
　　 3.檢測結(jié)果與臨床相關(guān)性分析，乙型肝炎耐藥變異位點(diǎn)與基因型、肝功能檢測指標(biāo)無相關(guān)性，而與HBV DNA病毒載量等指標(biāo)有一定