表達(dá)性載體pGEX-6p-1-hri的構(gòu)建以及人核糖核酸酶抑制因子對BALB-c小鼠肝癌和雞胚血管生成的抑制作用.pdf

1、人核糖核酸酶抑制因子(Human Ribonuclease Inhibitor，hRI)是廣泛存在于哺乳動物細(xì)胞漿中的一種酸性糖蛋白，分子量為50kD，其基因位于染色體11p15.5，三級結(jié)構(gòu)呈對稱的馬蹄型。hRI是核糖核酸酶A(Ribonuclcase A，RNase A)的抑制劑，可以有效地抑制其對RNA的水解作用。血管生成因子(Angiogenin,Ang)屬RNase A超家族成員。根據(jù)cDNA序列分析，Ang與RNase A有

2、35％的同源性。hRI能與Ang以1：1的化學(xué)劑量緊密結(jié)合(Ki=7.1× 10-16M)。動物實驗進一步證實，hRI具有抑制動物體內(nèi)移植瘤生長的作用。本實驗室前期已進行了大量的工作，我們從人胎盤和豬肝中提取hRI，給予荷瘤小鼠后可以抑制乳腺癌實體瘤Ca761，肉瘤S180的生長。 從組織中提取的該蛋白產(chǎn)量較少，成本高，不宜大批量生產(chǎn)，生產(chǎn)工藝復(fù)雜，化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，生物半衰期短，成為其臨床應(yīng)用的瓶頸。本試驗針對其特點，給單體RI

3、蛋白加上谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GST)標(biāo)簽，構(gòu)建成融合表達(dá)蛋白(GST-hRI)，并將二者進行對比。結(jié)果發(fā)現(xiàn)融合蛋白(GST-hRI)無論在活性保持，半衰期延長方面都有顯著提高；探索最優(yōu)條件下融合蛋白(GST-hRI)的可溶性表達(dá)及其生物學(xué)作用。同時將上述純化的GST-hRI用于動物實驗，將BALB/C小鼠接種肝癌H22后，用該蛋白質(zhì)進行處理。通過荷瘤小鼠抑瘤實驗結(jié)果表明，治療組的血管計數(shù)、腫瘤大小及惡性程度與空白組有顯著差異。同時融合蛋白(