表達(dá)性載體pGEX-6p-1-hri的構(gòu)建以及人核糖核酸酶抑制因子對(duì)BALB-c小鼠肝癌和雞胚血管生成的抑制作用.pdf

1、人核糖核酸酶抑制因子(Human Ribonuclease Inhibitor，hRI)是廣泛存在于哺乳動(dòng)物細(xì)胞漿中的一種酸性糖蛋白，分子量為50kD，其基因位于染色體11p15.5，三級(jí)結(jié)構(gòu)呈對(duì)稱的馬蹄型。hRI是核糖核酸酶A(Ribonuclcase A，RNase A)的抑制劑，可以有效地抑制其對(duì)RNA的水解作用。血管生成因子(Angiogenin,Ang)屬RNase A超家族成員。根據(jù)cDNA序列分析，Ang與RNase A有

2、35％的同源性。hRI能與Ang以1：1的化學(xué)劑量緊密結(jié)合(Ki=7.1× 10-16M)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)，hRI具有抑制動(dòng)物體內(nèi)移植瘤生長(zhǎng)的作用。本實(shí)驗(yàn)室前期已進(jìn)行了大量的工作，我們從人胎盤和豬肝中提取hRI，給予荷瘤小鼠后可以抑制乳腺癌實(shí)體瘤Ca761，肉瘤S180的生長(zhǎng)。 從組織中提取的該蛋白產(chǎn)量較少，成本高，不宜大批量生產(chǎn)，生產(chǎn)工藝復(fù)雜，化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，生物半衰期短，成為其臨床應(yīng)用的瓶頸。本試驗(yàn)針對(duì)其特點(diǎn)，給單體RI

3、蛋白加上谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GST)標(biāo)簽，構(gòu)建成融合表達(dá)蛋白(GST-hRI)，并將二者進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果發(fā)現(xiàn)融合蛋白(GST-hRI)無(wú)論在活性保持，半衰期延長(zhǎng)方面都有顯著提高；探索最優(yōu)條件下融合蛋白(GST-hRI)的可溶性表達(dá)及其生物學(xué)作用。同時(shí)將上述純化的GST-hRI用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，將BALB/C小鼠接種肝癌H22后，用該蛋白質(zhì)進(jìn)行處理。通過(guò)荷瘤小鼠抑瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，治療組的血管計(jì)數(shù)、腫瘤大小及惡性程度與空白組有顯著差異。同時(shí)融合蛋白(