表達(dá)性載體pGEX-6p-1-hri的構(gòu)建以及人核糖核酸酶抑制因子對(duì)BALB-c小鼠肝癌和雞胚血管生成的抑制作用.pdf_第1頁(yè)
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1、人核糖核酸酶抑制因子(Human Ribonuclease Inhibitor,hRI)是廣泛存在于哺乳動(dòng)物細(xì)胞漿中的一種酸性糖蛋白,分子量為50kD,其基因位于染色體11p15.5,三級(jí)結(jié)構(gòu)呈對(duì)稱的馬蹄型。hRI是核糖核酸酶A(Ribonuclcase A,RNase A)的抑制劑,可以有效地抑制其對(duì)RNA的水解作用。血管生成因子(Angiogenin,Ang)屬RNase A超家族成員。根據(jù)cDNA序列分析,Ang與RNase A有

2、35%的同源性。hRI能與Ang以1:1的化學(xué)劑量緊密結(jié)合(Ki=7.1× 10-16M)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí),hRI具有抑制動(dòng)物體內(nèi)移植瘤生長(zhǎng)的作用。本實(shí)驗(yàn)室前期已進(jìn)行了大量的工作,我們從人胎盤和豬肝中提取hRI,給予荷瘤小鼠后可以抑制乳腺癌實(shí)體瘤Ca761,肉瘤S180的生長(zhǎng)。 從組織中提取的該蛋白產(chǎn)量較少,成本高,不宜大批量生產(chǎn),生產(chǎn)工藝復(fù)雜,化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定,生物半衰期短,成為其臨床應(yīng)用的瓶頸。本試驗(yàn)針對(duì)其特點(diǎn),給單體RI

3、蛋白加上谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GST)標(biāo)簽,構(gòu)建成融合表達(dá)蛋白(GST-hRI),并將二者進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果發(fā)現(xiàn)融合蛋白(GST-hRI)無(wú)論在活性保持,半衰期延長(zhǎng)方面都有顯著提高;探索最優(yōu)條件下融合蛋白(GST-hRI)的可溶性表達(dá)及其生物學(xué)作用。同時(shí)將上述純化的GST-hRI用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn),將BALB/C小鼠接種肝癌H22后,用該蛋白質(zhì)進(jìn)行處理。通過(guò)荷瘤小鼠抑瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,治療組的血管計(jì)數(shù)、腫瘤大小及惡性程度與空白組有顯著差異。同時(shí)融合蛋白(

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