乳腺腫瘤差異表達(dá)譜的初步分析.pdf

1、目的 探討用限制片段差異顯示聚合酶鏈反應(yīng)(RestrictionFragmentDifferentialDisplay-PolymeraseChainedReaction，RFDD-PCR)技術(shù)建立基因差異表達(dá)譜的方法，及其應(yīng)用于高通量分析人類疾病差異表達(dá)譜的可行性。初步分析比較乳腺腫瘤各階段表達(dá)譜特征，篩選乳腺腫瘤侯選基因，為進(jìn)一步研究提供線索。材料與方法采集乳腺癌根治術(shù)病人的乳腺癌組織、乳腺癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)及正常乳腺組織，用RFDD-P

2、CR技術(shù)平行操作，獲得三種組織全部轉(zhuǎn)錄組片段。然后以7％尿素變性聚丙烯酰胺電泳進(jìn)行表達(dá)差異基因片段的分離、顯示，結(jié)合http：//www.Qbiogene.com/display/數(shù)據(jù)庫(kù)資料，應(yīng)用IMAGETOOL，ImageQuantTL等軟件，對(duì)各組織間有表達(dá)差異的基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析，篩選乳腺腫瘤侯選基因。結(jié)果建立了乳腺癌組織、乳腺癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)及正常乳腺組織的基因表達(dá)譜，獲得基因片段5407個(gè)，其中在癌組織和正常組織間有表達(dá)差異

3、的片段為1491個(gè)，癌組織與轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)間的差異片段有1176個(gè)，而轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)與正常組織間的差異片段為1462個(gè)，分別占表達(dá)數(shù)的40.9％，33.9％，39.6％。經(jīng)差異片段的生物信息學(xué)分析，已篩選出部分乳腺癌侯選基因所對(duì)應(yīng)的條帶，包括新的乳腺腫瘤相關(guān)基因，如PPARA，BCL11B等，以及可能為新基因/EST的候選片段，有待進(jìn)一步研究證實(shí)。結(jié)論RFDD-PCR技術(shù)可以檢測(cè)出大量表達(dá)基因，并同時(shí)比較三種或三種以上樣本的表達(dá)差異，尤其適用于