大豆素的體外抗氧化作用及對(duì)酒精性肝損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：以大豆素（Daidzein，DAI）為研究對(duì)象，研究DAI的體外抗氧化活性及對(duì)大鼠原代肝細(xì)胞酒精性肝損傷的保護(hù)作用，并為治療酒精性肝損傷提供新的思路和解決方案。 方法： 1.模擬機(jī)體中黃嘌呤與黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)，產(chǎn)生超氧陰離子?O2-，檢測DAI清除?O2-能力；根據(jù)Fenton 反應(yīng)原理產(chǎn)生羥自由基?OH，檢測DAI清除?OH 能力。 2.兩步膠原酶技術(shù)分離培養(yǎng)大鼠原代肝細(xì)胞，并建立大鼠原代肝細(xì)胞酒精性

2、氧化損傷模型（100mM無水乙醇E-OH染毒大鼠肝細(xì)胞8h）。 3.MTS比色實(shí)驗(yàn)觀察不同劑量E-OH對(duì)大鼠原代肝細(xì)胞氧化損傷作用，及DAI的預(yù)作用（1.0μM的DAI預(yù)作用2 h）對(duì)E-OH致大鼠原代肝細(xì)胞酒精性氧化損傷的保護(hù)作用。 4.大鼠原代肝細(xì)胞在E-OH染毒前不同時(shí)間點(diǎn)經(jīng)1.0μM的DAI處理或不同劑量（0.5～20μM）DAI預(yù)作用2h，用酶學(xué)及生化學(xué)方法分析DAI預(yù)作用對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（A

3、lanine Aminotransferase，ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（Aspartate Aminotransferase，AST）活性，細(xì)胞中丙二醛（Malondialdehyde，MDA）、谷胱甘肽（Glutathione，GSH）水平和超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）活性，以確定DAI對(duì)肝細(xì)胞酒精性氧化損傷的最佳干預(yù)時(shí)間與干預(yù)劑量。 結(jié)果： 1.DAI對(duì)?O2-和?OH都

4、有一定的清除能力，并與槲皮素（Quercetin，QE）和VitC清除自由基的能力比較，DAI清除自由基的能力強(qiáng)于VitC但比QE弱。 2.MTS比色實(shí)驗(yàn)顯示隨著E-OH劑量的上升，對(duì)大鼠原代肝細(xì)胞酒精性氧化損傷加?。≒<0.05）；1.0μM的DAI預(yù)作用2h可明顯改善E-OH所致的氧化損傷（P<0.01）。 3.DAI預(yù)作用對(duì)酒精性肝損傷的保護(hù)作用的時(shí)間劑量效應(yīng)：E-OH暴露前2-6h經(jīng)0.5～2.5μM的DAI干預(yù)